[发明专利]一种可用于检测与肝癌相关的H19基因RNA甲基化程度的试剂盒及其应用在审
申请号: | 202010258136.8 | 申请日: | 2020-04-03 |
公开(公告)号: | CN111235278A | 公开(公告)日: | 2020-06-05 |
发明(设计)人: | 崔恒宓;孙振 | 申请(专利权)人: | 扬州大学 |
主分类号: | C12Q1/6886 | 分类号: | C12Q1/6886;C12N15/11 |
代理公司: | 扬州苏中专利事务所(普通合伙) 32222 | 代理人: | 许必元 |
地址: | 225009 *** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 检测 肝癌 相关 h19 基因 rna 甲基化 程度 试剂盒 及其 应用 | ||
1.一种可用于检测与肝癌相关的H19基因RNA甲基化程度的试剂盒,其特征在于,包括H19基因RNA甲基化特异性扩增上游引物、H19基因RNA甲基化特异性扩增下游引物及其甲基化特异性测序引物;其中:
所述的H19基因RNA甲基化特异性扩增上游引物的核苷酸序列为:
5’-AGAGTGGGAAGATAGGTAGTGTT-3’;
所述的H19基因RNA甲基化特异性扩增下游引物的核苷酸序列为:
5’-Biotin-AAACATACAACATCACCAAATCCACTAT-3’;
所述的H19基因RNA甲基化特异性测序引物的核苷酸序列为:
5’-GTTTGGGGAGTTGTAGTAG-3’ 。
2.一种权利要求1所述的可用于检测与肝癌相关的H19基因RNA甲基化程度的试剂盒的应用,其特征在于,该试剂盒可用于恶性肝癌辅助诊断。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,试剂盒用于恶性肝癌辅助诊断时,具体步骤为:
1)、从待检测组织样本中提取RNA;
2)、将提取的RNA进行重亚硫酸盐修饰;
3)、将重亚硫酸盐修饰后的RNA逆转录成cDNA;
4)、将获得的cDNA为模板,以H19基因RNA甲基化特异性扩增上游引物的核苷酸序列和H19基因RNA甲基化特异性扩增下游引物的核苷酸序列为引物序列,进行PCR扩增反应,得到PCR产物;其中:
H19基因RNA甲基化特异性扩增上游引物的核苷酸序列为:
5’-AGAGTGGGAAGATAGGTAGTGTT-3’;
H19基因RNA甲基化特异性扩增下游引物的核苷酸序列为:
5’-Biotin-AAACATACAACATCACCAAATCCACTAT-3’;
5)、以H19基因RNA甲基化特异性测序引物的核苷酸序列为测序引物序列,通过焦磷酸测序方法,对经步骤4)得到的PCR产物进行甲基化定量检测分析;
其中,H19基因RNA甲基化特异性测序引物的核苷酸序列为:
5’-GTTTGGGGAGTTGTAGTAG-3’。
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