[发明专利]一种从生物膜反应器活性污泥中富集分离高效聚磷菌的方法

权利要求书

1.一种从生物膜反应器活性污泥中富集分离高效聚磷菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取运行状态良好的生物膜反应器活性污泥，涡旋、离心后弃上清，对离心后沉淀再涡旋，得预处理污泥；所述离心的转速为12000rpm，所述离心的时间为30s；

(2)在厌氧状态下，将所述预处理污泥接种到厌氧液体培养基中静置24h，离心弃上清；将离心后的沉淀接种于好氧液体培养基中，有氧培养23h后，静置1h；所述离心的转速为6000rpm，所述离心的时间为20min；所述有氧培养在摇床上进行，所述摇床的转速为150rpm，所述有氧培养的温度为30±0.5℃；

所述厌氧液体培养基中包括以下浓度的成分：2～5g/L的NaAC、135～145mg/L的(NH₄)₂SO₄、12～16mg/L的CaCl₂·2H₂O、175～185mg/L的MgSO₄·7H₂O、0.3～0.5mL/L的微量元素液和0.5～1mL/L的维生素液；

所述好氧液体培养基中包括以下浓度的成分：135～145mg/L的KH₂PO₄、240～250mg/L的K₂HPO₄、135～145mg/L的(NH₄)₂SO₄、12～16mg/L的CaCl₂·2H₂O、175～185mg/L的MgSO₄·7H₂O、0.3～0.5mL/L的微量元素液和0.5～1mL/L的维生素液；

所述微量元素液包括以下浓度的成分：1.4～1.6g/L的FeCl₃·6H₂O、0.14～0.16g/L的H₃BO₃，0.03～0.05g/L的CuSO₄·5H₂O、0.17～0.19g/L的KI、0.12～0.14g/L的MnCl₂·4H₂O、0.05～0.07g/L的Na₂MO₄·2H₂O、0.11～0.13g/L的ZnSO₄·7H₂O和0.14～0.16g/L的CoCl₂·6H₂O；

所述维生素液包括以下浓度的成分：50～52mg/L的维生素B1、50～55mg/L的维生素B2、90～100mg/L的维生素B6、2～3g/L的维生素B12、8～10mg/L的叶酸、50～55mg/L的烟酸、50～55mg/L的泛酸钙、50～55mg/L的对氨基苯甲酸和20～21mg/L的生物素；

(3)重复步骤(2)至好氧吸磷量/厌氧释磷量比值下降时，停止循环，得体外富集驯化菌液；其中：

厌氧释磷量＝厌氧初期磷含量-厌氧末期磷含量式Ⅰ；

好氧吸磷量＝好氧末期磷含量-好氧初期磷含量式Ⅱ；

(4)将所述体外富集驯化菌液离心后弃上清，利用生理盐水将离心后的菌体沉淀稀释，取OD₆₀₀值为0.1～0.5之间的稀释液接种于固体分离培养基上培养2～3d，挑取菌落形态特征有明显差异并且变蓝的单菌落，重复在所述固体分离培养基上进行四区划线，收集所述固体分离培养基上形态一致的菌体，得高效聚磷菌；所述离心的转速为10000rpm，所述离心的时间为10min；利用生理盐水将离心后的菌体沉淀稀释成10^-1～10^-7倍；

所述固体分离培养基中含有BCIP显色液，还包括以下浓度的成分：2～3g/L的NaAC、180mg/L的KH₂PO₄、320mg/L的K₂HPO₄、1.4～1.6g/L的(NH₄)₂SO₄、150mg/L的CaCl₂·2H₂O、1.7g/L的MgSO₄·7H₂O、3～5mL/L的微量元素液、10mL/L的维生素液和15g/L的琼脂。