[发明专利]一种靶向GDNF基因启动子II区内增强子II的dsRNA及其应用

说明书

本发明公开了一种靶向GDNF基因启动子II区内增强子II的dsRNA及其应用。一种靶向GDNF基因启动子II区内增强子II的dsRNA，正向序列如SEQ ID NO.1所示，反向序列如SEQ ID NO.2所示。本发明所述的dsRNA可在制备抑制星形胶质母细胞瘤的药物和制备抑制星形胶质母细胞瘤迁移和侵袭的药物中应用。该dsRNA能特异性地显著降低人U251星形胶质母细胞瘤细胞中GDNF基因的转录水平，根据其序列包装的慢病毒Lenti‑E还显著降低了U251细胞的细胞增殖、迁移和侵袭能力，但对人正常原代星形胶质细胞HA没有影响；说明该dsRNA具有一定治疗胶质母细胞瘤的临床应用价值。

技术领域

本发明属于生物医药领域,涉及一种靶向GDNF基因启动子II区内增强子II的dsRNA及其应用。

背景技术

胶质母细胞瘤(GBM)是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤[1,2]，多为侵袭性生长，易复发难根治，病人的中位生存期仅有14-16个月[3,4]。目前对于GBM的发病机制尚不完全清楚。近来的研究发现，GBM的发生发展与许多细胞因子的表达异常有关，其中胶质细胞系源性神经营养因子(glial cell-line derived neurotrophic factor,GDNF)被认为是与GBM尤其是星形胶质细胞(Astrocyte,AST)起源的GBM最密切的细胞因子之一[5-7]。在成人脑组织中GDNF主要由星形胶质细胞分泌[8,9]，且广泛低表达于不同的脑区[10,11]。不同脑区分泌的GDNF对多巴胺能、运动、感觉等多种神经元具有促成熟和分化、营养和保护等作用[12,13]。GDNF表达下调或缺失可引起帕金森、老年痴呆等多种神经退行性疾病[14]。可见，GDNF是脑内重要的生理性营养因子和促分化因子，维持其表达稳定对于多种神经元正常功能的发挥具有重要意义。然而，近来的研究发现GDNF在人脑GBM尤其是AST起源的GBM中异常表达，其表达量比正常脑组织高出约5-6倍[15,16]。高表达的GDNF主要来自于GBM细胞，并以自分泌及旁分泌的形式参与GBM细胞的增殖、侵袭、迁移以及GBM内血管的新生过程[17-19]。进一步的研究发现，敲减GDNF可有效地抑制GBM的发展进程[20]。由此可见，在不影响或较少影响AST正常分泌GDNF的前提下，特异性地抑制GBM细胞GDNF的表达具有治疗GBM的潜在临床价值。然而，如何实现以上策略，至今尚不明确。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种靶向GDNF基因启动子II区内增强子II的dsRNA。

本发明的另一目的是提供该dsRNA的应用。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

一种靶向GDNF基因启动子II区内增强子II的dsRNA，正向序列如SEQ ID NO.1所示，反向序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明所述的dsRNA在制备抑制星形胶质母细胞瘤的药物中的应用。

本发明所述的dsRNA在制备抑制星形胶质母细胞瘤迁移和侵袭的药物中的应用。

靶向GDNF基因启动子II区内增强子II的shRNA，正义链序列如SEQ ID NO.15所示,反义链序列如SEQ ID NO.16所示。

所述的shRNA在制备抑制星形胶质母细胞瘤的药物中的应用。

所述的shRNA在制备抑制星形胶质母细胞瘤迁移和侵袭的药物中的应用。

含有本发明所述的shRNA的慢病毒pGCL-GFP载体。

本发明所述的慢病毒pGCL-GFP载体在制备抑制星形胶质母细胞瘤的药物中的应用。

所述的慢病毒pGCL-GFP载体在制备抑制星形胶质母细胞瘤迁移和侵袭的药物中的应用。

含有本发明所述的慢病毒pGCL-GFP载体包装的重组慢病毒。