[发明专利]一种嵌合型基因I型乙型脑炎病毒病毒样颗粒疫苗及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 202010261589.6 | 申请日： | 2020-04-04 |
| 公开（公告）号： | CN111454989B | 公开（公告）日： | 2022-03-08 |
| 发明（设计）人： | 田占成;周亚红;于瑞明;高闪电;独军政;殷宏;罗建勋;刘光远;关贵全;刘志杰 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/62;C07K19/00;A61K39/295;A61K39/12;A61P31/14 |
| 代理公司： | 兰州振华专利代理有限责任公司 62102 | 代理人： | 张晋 |
| 地址： | 730046 甘肃*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 嵌合 基因 型乙型 脑炎 病毒 颗粒 疫苗 及其 制备 方法 应用 | ||
1.递呈猪瘟病毒中和抗原表位的嵌合型基因I型乙型脑炎病毒病毒样颗粒的制备方法，其特征在于：将猪瘟病毒E2蛋白中和表位CTAVSPTTLRTEVVK编码序列插入到基因I型乙型脑炎病毒病毒样颗粒编码基因表达盒，同时将编码基因I型乙型脑炎病毒E蛋白的第108位苯丙氨酸(F)突变成丙氨酸(A)，得到融合基因SEQ ID No.1，再以融合基因为模板，通过PCR进行扩增，胶回收的PCR产物和真核表达载体pVAX1用EcoR I和Xba I双酶切后进行DNA凝胶回收，PCR和真核表达载体的胶回收产物进行连接再转化trans5α感受态，再将鉴定正确的阳性重组菌采用中提质粒试剂盒提取质粒，获得含有目的基因的重组pVAX1质粒，将重组pVAX1质粒瞬时转染到BHK-21细胞进行培养，再将转染的细胞培养上清收集，浓缩纯化后获得递呈猪瘟病毒E2蛋白线性中和抗原表位的基因I型乙型脑炎病毒病毒样颗粒。
2.根据权利要求1所述的递呈猪瘟病毒中和抗原表位的嵌合型基因I型乙型脑炎病毒病毒样颗粒的制备方法，其特征在于PCR扩增引物核苷酸序列为SEQ ID No.3和SEQ IDNo.4。
3.根据权利要求2所述的递呈猪瘟病毒中和抗原表位的嵌合型基因I型乙型脑炎病毒病毒样颗粒的制备方法，其特征在于通过体外基因合成的方法，将猪瘟病毒E2蛋白中和表位CTAVSPTTLRTEVVK编码序列插入到基因I型乙型脑炎病毒病毒样颗粒编码基因表达盒的三个Loop插入位点，插入位点分别位于乙型脑炎病毒E蛋白的P228-S229，T246-A247和S290-S291氨基酸位点之间。
4.权利要求1至3所述的任一方法制备的递呈猪瘟病毒中和抗原表位的嵌合型基因I型乙型脑炎病毒病毒样颗粒。
5.权利要求4所述的递呈猪瘟病毒中和抗原表位的嵌合型基因I型乙型脑炎病毒病毒样颗粒在制备同时免疫预防猪瘟病毒和流行性乙型脑炎病毒感染的疫苗制剂的应用。
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