[发明专利]一种SARS-CoV-2干粉化LAMP快速检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种SARS‑CoV‑2干粉化LAMP快速检测试剂盒，该试剂盒由干粉化O检测试剂、干粉化N检测试剂、复溶液、阳性对照干粉、阴性对照干粉和显色指示剂组成，以上6种试剂分别置于容器中。应用于本试剂盒中的特异性引物对应SARS‑CoV‑2特异性靶基因ORF1ab和N序列的8个区段，通过加入显色指示剂，阴阳性显色差异明显，具有灵敏度高、易于操作、结果判断简单等优点，适合于对当前COVID‑19疫情中的SARS‑CoV‑2快速检测。另外，本发明为干粉化的检测试剂，便于常温运输，且使用简单、快捷，无需专门仪器，降低成本并拓宽产品应用范围，更适用于现场对SARS‑CoV‑2的快速检测，具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种病毒快速检测试剂，特别涉及一种SARS-CoV-2干粉化LAMP快速检测试剂盒。

背景技术

一种新型冠状病毒（SARS‑CoV‑2）疫情呈现全球蔓延的趋势。截至2020年3月，该病毒已导致国内外数十万人感染，对全球公共卫生安全构成了巨大威胁。SARS‑CoV‑2是一种正义单链RNA病毒，RNA基因组包含29891个核苷酸，编码9860个氨基酸，与SARS‑CoV的核苷酸同源性为82%。COVID‑19疫情的快速蔓延，导致疑似感染者和密切接触者数量激增。尽早进行病毒检测，不仅可以使感染者获得及时治疗，降低死亡风险，还能有效控制传染源，通过隔离切断传播途径。

SARS-CoV-2核酸检测可为诊断提供直接证据，在目前最新版本诊疗方案中，SARS-CoV-2核酸的检出仍是唯一确诊依据。实时荧光逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测方法是目前针对于SARS-CoV-2核酸检测的首选方法，如中国疾病预防控制中心就发布了针对于SARS-CoV-2的开放读码框1ab（ORF1ab）和核壳蛋白（N）特异性靶位基因核酸qRT-PCR检测所对应的引物和探针序列。但其有其天然的缺陷，需要昂贵的检测仪器、试剂和专业技术人员，检测成本高，更加无法满足突发事件中基层及现场的快速检测需求。也有新闻报导，已有企业开发出针对SARS-CoV-2核酸检测的LAMP试剂，但是其保藏条件相对苛刻，需要在-20℃进行保藏，以避免失效。

2000年日本研究人员Notomi等人发明了一种新型的核酸体外恒温扩增特异片段的分子检测技术，即环介导的恒温扩增技术。该技术利用2对特殊引物识别靶基因的6个区段，在恒温条件下（60～65℃），具有链置换活性的Bst DNA聚合酶在模板两端引物结合处循环出现环状单链结构，在1h内就可以对目的基因进行高效、特异的链置换扩增反应。与常规PCR相比，无需反复变温、电泳判读等过程，在灵敏度、特异性和检测范围等技术指标上高于PCR技术，而不依赖专门的仪器可以实现现场的快速检测，其成本远低于qPCR方法。而在实际的应用中，如果在非实验室的条件下利用LAMP技术进行快速检测，检测前都要配制相应的反应体系溶液，容易导致由于多次操作引起的误差，且易造成实验区间的交叉污染，检测所需的部分试剂需要冷冻储存，不适合高温长途运输，尤其是Bst DNA聚合酶，需要在-20℃条件下保存，不宜反复冻融，以免影响酶活，因此会增加试剂的运输成本。目前LAMP技术已被广泛应用众多微生物的检测应用中，不过尚未发布基于LAMP技术的SARS-CoV-2国家检验标准，且市场上基于LAMP技术的SARS-CoV-2快速诊断试剂盒较少，且能用于常温运输的干粉型同类产品尚未出现。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的至少一种不足，提供一种可以常温运输的干粉化SARS-CoV-2快速检测试剂。该试剂盒涵盖从取样到检测的整体解决方案，可满足当前疫情中对SARS-CoV-2快速检测的需求。

本发明所采取的技术方案是：

本发明的第一个方面，提供：