[发明专利]一种肿瘤干细胞检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种肿瘤干细胞检测试剂盒，其包含能够特异性结合短异构型DCLK1蛋白的抗体，能指示结肠癌干细胞的存在及分布，有着广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体的涉及一种肿瘤干细胞检测试剂盒。

背景技术

在中国，结直肠癌是第四常见的癌症和第五常见的死亡原因，每年估计有 33.13万例新增患者和15.93 万例死亡患者[1]，且其发病率随着患者年龄的增长而不断上升。随着研究的不断深入，人们越来越认识到，大多数结直肠癌（colorectal cancer，CRC）起源于结直肠腺瘤（colorectal adenoma，CRA），结直肠腺瘤是结直肠表面的异常增生和突起，是消化内科的一种常见疾病。腺瘤发展缓慢，有时可通过一系列遗传和表观遗传学改变发生恶性转化，从可检测到的腺瘤进展到癌症可能需要至少 10 年的时间[2]。但由于该病起病隐匿，临床表现缺乏特异性，往往不易被发现。因此，通过适当的筛查和监测，可以早期发现并切除这些息肉，从而降低癌症的发生率。但是癌症早期筛查率仍然不理想。目前对结直肠癌的早期诊断仍是国内外所面临的巨大挑战之一。由于从细胞水平的检查存在局限性，比如粪隐血试验（FOBT）、有创结肠镜联合病理活组织检查的早期检出预警信号较低，同时漏诊率较高，并发症多，结果易受多因素影响；因此迫使研究者从分子水平寻找有效的无创性方法[3]。肿瘤干细胞学说的出现为肿瘤的诊断与治疗提供了新的靶点，而肿瘤干细胞的表面标志物的选择，则成为早期诊断及攻克肿瘤的前提[4]。

肿瘤干细胞（Cancer Stem Cell ,CSC）存在于肿瘤组织中，数量极少、具有无限增殖潜能，能够分化为肿瘤细胞，并对肿瘤的发生、发展和转移起决定性作用，也是肿瘤复发、转移和治疗失败的根源[5]。已知的肿瘤干细胞表面标志物有CD133[6]、CD44[7]、CD117[8]及Doublecortin样激酶一1[9]，(Doublecortin．1ike kinase 1，DCLKl)等。DCLK1是蛋白激酶超家族和doublecortin家族的成员，其编码基因位于人类染色体13q13[10]。近年研究发现，DCLKl在多数恶性肿瘤组织如乳腺癌[11]，胰腺癌[12]和前列腺癌[13]上皮细胞的细胞质和基质中表达，而且与肿瘤转移及不良预后有关。研究还发现，表达DCLKl的结直肠癌细胞系具有癌症干细胞样特征[14]，进一步的研究表明DCLK1作为肿瘤干细胞标志物，有两种不同的形式，一种是从DCLK1基因的β启动子起始翻译的短异构体，一种是从α启动子起始翻译的长异构体。其中短异构体在人结直肠癌和人结肠癌细胞中表达，而长异构体则在正常细胞中表达。以上结果表明肿瘤干细胞标志物DCLKI的短异构体有作为结直肠癌早期诊断指标的潜力，对肿瘤复发及疾病预后有价值[15]。

发明内容

基于上述发现，本发明的首要目的在于提供一种通过检测样本中短异构型DCLK1蛋白的存在及含量，提高结直肠癌早期诊断及样本分类准确性的方法。

本发明提供以下技术方案：

一种抗短异构型DCLK1(DCLK1-S)抗体，由重链和轻链组成，重链和轻链分别包括可变区和恒定区，其中重链可变区包含3个互补决定区，分别命名为VH-CDR1，VH-CDR2,VH-CDR3；同样地，轻链可变区也包含3个互补决定区，分别命名为VL-CDR1,VL-VDR2,VL-CDR3 。所述DCLK1-S抗体的重链包含如SEQ ID NO:6所示的VH-CDR1氨基酸序列，和如SEQ ID NO:7所示的VH-CDR2氨基酸序列，和如SEQ ID NO:8所示的VH-CDR3氨基酸序列；所述DCLK1-S抗体的轻链包含如SEQ ID NO:9所示的VL-CDR1氨基酸序列，和如SEQ ID NO:10所示的VL-CDR2氨基酸序列，和如SEQ ID NO:11所示的VL-CDR3氨基酸序列。

本发明所述DCLK1-S抗体包含SEQ ID NO :4 所示的重链可变区和SEQ ID NO :5所示的轻链可变区。