[发明专利]一种虎舌红愈伤诱导及增殖方法

说明书

本发明涉及植物培养技术领域，具体设计一种虎舌红愈伤诱导的方法，以虎舌红成熟种子为材料接种于特定的诱导培养基和增殖培养基，6个月平均诱导率可达60%，1个月平均增殖率达200%。本发明为虎舌红的愈伤诱导和增殖提供了一种新的方法，该方法污染率低、效率高为虎舌红的保存、转化、生理生化等相关研究以及后续培养分化获得大量健壮组培苗奠定了基础。

技术领域

本发明涉及植物培养领域，具体地涉及一种虎舌红愈伤组织的诱导及增殖方法。

背景技术

虎舌红( Ardisia mamillata Hance) 是紫金牛科紫金牛属多年生常绿小灌木，其叶花果并美，通体长满了茸毛，在阳光的照射下，紫红色的叶和鲜红的果相映，折射出太阳七色光彩，给人带来喜庆吉祥的气氛，曾荣获“中国99昆明世界园艺博览会单项竞赛室内观叶植物大奖”。此外，虎舌红也是一种罕见的药用植物，全草有清热利湿、活血、止血止痛、祛腐生肌等功效。

虎舌红的常规繁殖有有性繁殖和无性繁殖两种。有性繁殖主要是种子繁殖，虎舌红虽能种子繁殖，但实生苗性状不稳定，易变异，难于保持母本的优良种质特性，也难于形成品种或品系。无性繁殖主要包括扦插繁殖和嫁接繁殖。但由于紫金牛属植物生长较缓慢，主、侧枝年生长量极其有限，因此用此方法扩大繁殖系数受到较大制约。所以常规繁殖无法满足当今虎舌红市场需要，而进行虎舌红的组织培养研究目前来说不失为一种最有效的途径，而有关虎舌红利用成熟种子诱导愈伤及增殖的技术还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种虎舌红愈伤组织的诱导方法，以解决现有技术中存在的上述问题。

本发明提供的技术方案如下：

1）采种：10月中旬或翌年4月底采集虎舌红成熟种子；

2）处理及消毒：取虎舌红种子水中清洗用手揉搓去掉外种皮，清洗干净后转至超净工作台依次用酒精、升汞灭菌处理，其中用75%(V/V)酒精浸泡1 min，转至0.1%(W/V) HgCl₂10 min后，无菌水漂洗3-5次，每次无菌水漂洗时间为1-3 min，而后获得消毒的虎舌红外植体。

3）愈伤组织诱导：取步骤2）已消毒的外植体接种于诱导培养基中，诱导培养基为MS添加4.0 mg·L^-1 2, 4-D、1.0 mg·L^-1 6-BA、30.0 g·L^-1蔗糖、7.5 g·L^-1琼脂，培养条件为：光照强度1200-2000 Lux，光照时间16 h·d^-1，温度 25±2 °C，pH=5.8。

4）愈伤组织增殖：取步骤3）所得的初代愈伤组织转接于继代增殖培养基中， 继代增殖培养基为MS添加0.4 mg·L^-1 2, 4-D、0.1 mg·L^-1 6-BA、20.0 g·L^-1蔗糖、7.5 g·L^-1琼脂，培养条件为：光照强度1200-2000 Lux，光照时间16 h·d^-1，温度 25±2 °C，pH=5.8。

本发明的显著优点：

一、本发明方法以虎舌红成熟种子为外植体，在材料选取上较易获得，不会对母株产生伤害。

二、相对与芽、茎段等其它外植体，种子消毒成功率高，接种容易快捷 ，从而使污染率大大降低。

三、本发明采用的培养基构成使得愈伤组织诱导成功率及增殖率大大提高，6个月平均诱导率可达60%，1个月平均增殖率达200%，为虎舌红组培快繁和品种改良奠定基础，本发明方法可以为虎舌红的遗传转化及工厂化育苗提供技术支持。

附图说明

图1 虎舌红成熟种子。