[发明专利]一种中药贝母DNA提取试剂及提取方法

说明书

本发明公开了一种中药贝母DNA提取试剂，包括核裂解液、CTAB缓冲液和TE Buffer，其中核裂解液包括Tris‑HCl、EDTA、NaCl、PVP‑40、β‑巯基乙醇，与CTAB缓冲液组成相近；本发明DNA提取试剂适用于中药贝母DNA的提取，次生代谢产物去除率高，贝母DNA完整度好；本发明还提供了一种中药贝母DNA提取方法，采用上述提取试剂，以已有的CTAB法为基础，进行提取试剂配方的改进以及提取步骤的优化，能获高纯度、高质量的贝母总DNA，提取方法简单易控制，污染少。

技术领域

本发明涉及分子生物技术领域，尤其涉及一种中药贝母DNA提取试剂及提取方法。

背景技术

目前，分子生物学技术已被广泛应用于中药材鉴定等方面，其中DNA的提取和纯化是中药材研究的重要基础，快速有效地大量提取高质量的DNA是是对中药材实施分子标记、基因文库构建、基因分离以及遗传转化及分子鉴定的重要前提。然而大多数中药材经过加工处理后，其中所含的DNA可能会受到不同程度的降解，不利于保持DNA的完整性；其次，中药材含有的次生代谢物很难与DNA分开，会直接影响中药材DNA的提取及后续研究。同种中药材用不同方法提取的DNA，其纯度和提取效率不尽相同，不同中药材用相同方法提取DNA的结果也不同。

贝母属为百合科多年生草本植物，大多数种类鳞茎供药用，有清热润肺，止咳祛痰的功效。该属全世界约有130种，我国有61种(含50个变种，5个变型)，其中具有药用价值的有20余种，常用药材品种主要为川贝母、平贝母、浙贝母和伊贝母等。贝母属植物种间形状交叉普遍，由于自然条件和地形多变，给传统形态分类带来很大不便，因此，对贝母DNA的分子检测成为有效分类的方法之一，而如何有效地提取高质量的贝母DNA是保证快速有效分子检测的前提和基础。目前，对于提取贝母DNA的方法一般有试剂盒法，CTAB法和SDS法。虽然试剂盒法操作简便且耗时短，但提取出的DNA完整性有时欠佳。因此，本发明在之前CTAB法的基础上进行改良，建立一种有效和高质量的贝母总DNA提取方法。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种中药贝母DNA提取试剂，包括核裂解液、CTAB缓冲液和TE Buffer，适用于中药贝母DNA的提取，次生代谢产物去除率高，贝母DNA完整度好；

本发明的另一个目的是提供一种中药贝母DNA提取方法，采用上述提取试剂，以已有的CTAB法为基础，进行提取试剂配方的改进以及提取步骤的优化，能获高纯度、高质量的贝母总DNA，提取方法简单易控制，污染少。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

一种中药贝母DNA提取试剂，包括核裂解液、CTAB缓冲液、TE Buffer，所述核裂解液包括：1mol/L pH 8.0Tris-HCl 90-110mL、0.5mol/L pH 8.0EDTA 8-12mL、NaCl 13-16g、PVP-40 18-22g、β-巯基乙醇1.5-2.5ml，ddH₂O定容至1000mL。

优选地，所述核裂解液包括：1mol/L pH 8.0Tris-HCl 100mL、0.5mol/L pH8.0EDTA 10mL、NaCl 14.6g、PVP-40 20g、β-巯基乙醇2ml，ddH₂O定容至1000mL。

Tris-HCl(pH8.0)主要是提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；EDTA螯合Mg²⁺或Mn²⁺离子，抑制DNase活性；NaCl提供一个高盐环境，使脱氧核糖核蛋白可溶。

进一步地，所述CTAB缓冲液包括：CTAB 28-32g、NaCl 75-85g、0.5mol/L pH8.0EDTA 35-45mL、1mol/L pH 8.0Tris-HCl 95-105mL、PVP-40 18-22g、β-巯基乙醇1.5-2.5ml，ddH₂O定容至1000mL。