[发明专利]检测AGTR1基因SNP位点KASP分型引物及其应用

说明书

本发明提供的用于检测AGTR1基因SNP位点KASP分型引物对于rs5182及rs5186位点的检测具有灵敏度高、特异性好等优点，KASP分型结果与PCR产物直接测序验证结果符合率为100%，实现了AGTR1基因rs5182及rs5186位点单核苷酸多态性的简单、快速、成本低、通量高、结果准确的检测。该方法对于人类AGTR1基因rs5182及rs5186位点单核苷酸多态性相关研究具有重要意义及价值。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及用于两个SNP位点检测的引物及其应用，更具体的涉及rs5182位点及rs5186位点KASP分型检测引物的试剂盒及其应用。

背景技术

目前的研究显示I型血管紧张素II受体(Angiotensin II receptor type 1，AGTR1)基因所编码的AngII不仅是一种血管活性物质，而且更为重要的是它是一种生长因子，在一些以组织器官进行性纤维化为特征的慢性疾病的进展中也起着非常重要的作用。

目前的研究表明，AGTR1基因多态性与许多种疾病相关，其中已经证明有影响作用的包括原发性高血压、糖尿病慢性肾脏疾病、阿尔茨海默症、恶性肿瘤、非酒精性脂肪性肝、大动脉粥样硬化、肺源性心脏病、鼻咽癌。AGTR1基因多态性位点的检测，在许多疾病的研究中都具有重要意义。

发明内容

针对现有技术中存在的不足问题，本发明的目的在于提供用于检测rs5182及rs5186位点的竞争性等位基因特异性PCR(Kompetitive Allele Specific PCR，KASP)分型引物，通过对AGTR1(Angiotensin II receptor type1)基因rs5182及rs5186位点单核苷酸多态性进行准确的检测，可简单、快速、成本低、通量高、结果准确的检测rs5182及rs5186位点单核苷酸多态性信息。

本发明通过以下技术方案实现的：

本发明提供用于检测AGTR1基因SNP位点KASP分型引物，包括分别检测rs5182位点的引物组1和rs5186位点的引物组2。

引物组1由引物A、引物B和引物C组成。

引物组2由引物D、引物E和引物F组成。

优选的，所述引物A的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，5’末端连接荧光基团FAM；引物B的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，5’末端连接荧光基团HEX；引物C的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

所述引物A、引物B和引物C用于使用KASP分型进行rs5182位点单核苷酸多态性检测。

优选的，所述引物D的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，5’末端连接荧光基团FAM；引物E的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，5’末端连接荧光基团HEX；引物F的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

所述引物D、引物E和引物F用于使用KASP分型进行rs5186位点单核苷酸多态性检测。

同时，本发明还提供一种检测AGTR1基因SNP位点KASP分型试剂组合物。

所述的KASP分型试剂组合物由引物预混液、PCR Master Mix和RNase-free水组成。

优选的，所述引物预混液由引物组1及引物组2组成。

同时，本发明还提供了一种用于检测AGTR1基因SNP位点KASP分型试剂组合物在制备检测试剂盒中的应用。

所述检测AGTR1基因SNP位点KASP分型试剂中还包括qRT-PCR反应常用试剂和其它一些辅助试剂，这些试剂的特性以及它们的配制方法均是本领域技术人员所熟知的；在本发明的具体实施方案中，使用了qRT-PCR的方法。