[发明专利]抗CD20蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及生物检测领域，提供了一种抗CD20蛋白单克隆抗体,其重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。发明人还提供了抗CD20蛋白单克隆抗体的制备方法，选取人CD20氨基酸SEQ ID NO.1序列,在其氨基端添加了一个半胱氨酸后,与KLH偶联，作为免疫原。发明人还提供了一株分泌抗CD20蛋白的杂交瘤细胞系，所述细胞系为小鼠杂交瘤细胞系AbM58020‑32A8‑PU，保藏号为：CGMCC NO.17491。抗CD20蛋白单克隆抗体,具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达CD20蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别涉及抗CD20蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用。

背景技术

CD20为最为特异的B细胞标记，目前应用甚为广泛的CD20单抗如美罗华之所以能对B细胞淋巴瘤有疗效，就是通过和CD20靶点结合起作用的。但需要注意的是CD20只在B细胞发育的中间阶段表达，幼稚的B细胞和终末分化的浆细胞均为阴性，它表达于细胞的胞膜。阳性区域主要是在淋巴滤泡，滤泡外的区域也可有少许阳性细胞。

CD20在大多数B细胞白血病/淋巴瘤中表达，早期前体B淋巴母细胞白血病/淋巴瘤可能呈阴性，慢性淋巴细胞白血病/小细胞淋巴瘤可能呈弱染色。浆细胞肿瘤通常CD20阴性，而在T细胞淋巴瘤CD20几乎都是阴性。因此，CD20对B细胞淋巴瘤和急慢性淋巴细胞白血病等有较好的细胞特异性，因此在恶性淋巴瘤尤其是T和B细胞淋巴瘤的分类上，CD20是最常用的B细胞标记物。

发明内容

发明人提供了一种抗CD20蛋白单克隆抗体，所述单克隆抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体重链和轻链可变区氨基酸序列分别是SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列所编码。

进一步地，所述单克隆抗体特异性识别CD20蛋白。

进一步地，所述单克隆抗体特异性识别中SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCC NO.17491的杂交瘤细胞系产生。所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞系AbM58020-32A8-PU，分类命名为：小鼠杂交瘤细胞系，该细胞系已于2019年04月3日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

进一步地，所述抗CD20蛋白为小鼠IgG_2b亚型单克隆抗体。

发明人还提供了一种抗CD20蛋白单克隆抗体的制备方法，选取CD20蛋白中SEQ IDNO.1所示的氨基酸序列,在其氨基端添加了一个半胱氨酸后,与载体蛋白KLH进行偶联作为免疫原。

发明人还提供了一株分泌抗CD20蛋白的杂交瘤细胞系，所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞系AbM58020-32A8-PU，所述细胞系保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC NO.17491。

发明人还提供上述任一所述的抗CD20蛋白单克隆抗体，在CD20蛋白免疫检测中的用途。

进一步地，所述免疫检测包括免疫组织化学法，免疫印迹法和酶联免疫法。