[发明专利]适用于PacBio测序平台的原核全长初始转录本建库方法及应用

权利要求书

1.一种适用于PacBio测序平台的原核全长初始转录本建库方法，其特征在于，包括：1)在原核生物的总RNA的3’末端加尾；2)3’末端加尾的原核总RNA的5’末端添加生物素标记帽子；3)捕获带有生物素标记的初始转录本；4)合成初始转录本全长cDNA；5)全长cDNA的PacBio文库构建。

2.根据权利要求1所述的一种适用于PacBio测序平台的原核全长初始转录本建库方法，其特征在于，所述合成初始转录本全长cDNA包括以下步骤：

(1)合成初始转录本全长cDNA的第一条链；

(2)cDNA的第一条链末端添加额外的核苷酸序列，作为第二条链的引物结合位点；

(2)合成初始转录本全长cDNA的的第二条链；

(3)扩增并纯化全长cDNA。

3.根据权利要求2所述的一种适用于PacBio测序平台的原核全长初始转录本建库方法，其特征在于，所述步骤(2)中采用末端转移酶TdT给cDNA的第一条链末端添加额外的核苷酸序列

4.根据权利要求3所述的一种适用于PacBio测序平台的原核全长初始转录本建库方法，其特征在于，使用TdT进行末端碱基添加的反应体系为：初始转录本全长cDNA的第一条链纯化产物39μL、TdT Buffer(10X)5μL、CoCl₂solution(2.5mM)5μL、10mM dCTP或dGTP 0.5μL、Terminal Transferase(20units/μl)0.5μL。

5.根据权利要求1所述的一种适用于PacBio测序平台的原核全长初始转录本建库方法，其特征在于，所述全长cDNA的PacBio文库构建包括以下步骤：

(1)初始转录本全长cDNA损伤修复；

(2)末端修复；

(3)对末端修复产物连接测序接头；

(4)核酸外切酶消化及纯化。

6.根据权利要求1所述的一种适用于PacBio测序平台的原核全长初始转录本建库方法，其特征在于，所述文库构建还包括文库质检以确定文库大小。

7.一种适用于原核生物的全长转录组测序方法，其特征在于，包括采用权利要求1-6任一项所述的建库方法进行原核生物全长初始转录本建库，然后采用高通量PacBio测序平台进行测序。