[发明专利]一种人类睾丸组织悬液冷冻保护剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种人类睾丸组织悬液冷冻保护剂及其制备方法，人类睾丸组织悬液冷冻保护剂包括以下原料：氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、磷酸二氢钾、碳酸氢钠、HEPES、咖啡因、丙酮酸钠、己酮可可碱、甘氨酸、葡萄糖和蔗糖；人类睾丸组织悬液冷冻保护剂还包括乳酸钠和甘油。本发明还包括上述人类睾丸组织悬液冷冻保护剂的制备方法和采用上述人类睾丸组织悬液冷冻保护剂的冷冻方法。本发明针对睾丸组织悬液专门设计了冷冻保护剂，能够提升睾丸精子冷冻复苏效果，有效解决了存在安全隐患、冷冻复苏效果不佳和不易找到活动睾丸精子等问题，具有十分重要的临床应用价值。

技术领域

本发明涉及冷冻保护剂及其制备技术领域，具体涉及一种人类睾丸组织悬液冷冻保护剂及其制备方法。

背景技术

随着社会工业化发展，环境污染愈加严重，不孕症比例越来越多，在育龄期夫妇中其发病率已高达9.3％，而其中，男方因素约占30～50％，在男性因素中，无精症患者占比又高达10～20％。1992年，卵胞浆单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection，ICSI)技术的出现实现了男性少弱精患者生育后代的愿望，1993年Schoysman应用睾丸精子行ICSI并获得成功，为后续睾丸精子的临床应用带来福音。临床上，无精症患者在排除遗传性疾病的基础上一般首先要行睾丸诊断性活检，其结果可判断睾丸内是否有精子，当诊断性活检查见有睾丸精子时，可选择将睾丸精子冷冻起来，以备日后的辅助生殖周期中使用。

精子冷冻的两大技术要素为冷冻方法及冷冻保护剂，其选择都应据冷冻精子的特质进行。人精子的运动能力是通过在精子在进入附睾中，发生一系列的形态结构、生化代谢及生理功能的变化后获得的，睾丸中精子从形态学及结构上来看已基本成熟，但不具备运动能力。因此，睾丸精子冷冻相对常规精液冷冻，具有数量少，活动力弱，多为不动或有微弱的颤动精子的特点。

目前市面上无专门针对睾丸组织的冷冻保护剂，大多运用普通的冷冻保护剂进行冷冻，冷冻保护剂在冷冻过程中的作用主要为减少冰晶形成，使精子顺利通过临界温度，主要分为渗透性冷冻保护剂及非渗透性冷冻保护剂两大类。市面上的现有冷冻保护剂主要含卵黄、白蛋白等生物源性物质，在使用安全性上存在一定隐患。使用普通冷冻保护剂进行冷冻，由于其非睾丸精子专用，加之睾丸精子的特性，普遍存在冷冻效果不理想，复苏后无法找到可供ICSI使用的活动的睾丸精子的情况时有发生。

发明内容

针对现有技术中的上述不足，本发明提供了一种人类睾丸组织悬液冷冻保护剂及其制备方法，针对睾丸组织悬液专门设计了冷冻保护剂，能够提升睾丸精子冷冻复苏效果，有效解决了存在安全隐患、冷冻复苏效果不佳和不易找到活动睾丸精子等问题，具有十分重要的临床应用价值。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种人类睾丸组织悬液冷冻保护剂，每100mL包括以下重量原料：氯化钠0.35～0.65g、氯化钾0.03～0.045g、氯化钙0.035～0.047g、氯化镁0.008～0.0151g、磷酸二氢钾0.004～0.007g、碳酸氢钠0.2～0.32g、HEPES 0.3～0.55g、咖啡因0.035～0.058g、丙酮酸钠0.0017～0.0035g、己酮可可碱0.102～0.555g、甘氨酸0.5～1.3g、葡萄糖0.08～0.209g和蔗糖1～2.5g；

每100mL人类睾丸组织悬液冷冻保护剂还包括乳酸钠130～280μL和甘油10～65mL。

进一步，每100mL人类睾丸组织悬液冷冻保护剂包括以下重量原料：氯化钠0.584g、氯化钾0.04g、氯化钙0.04g、氯化镁0.01g、磷酸二氢钾0.005g、碳酸氢钠0.26g、HEPES 0.477g、咖啡因0.048g、丙酮酸钠0.0028g、己酮可可碱0.208g、甘氨酸1g、葡萄糖0.109g和蔗糖1.712g。

进一步，每100mL的人类睾丸组织悬液冷冻保护剂包括乳酸钠188μL和甘油30mL。