[发明专利]制备检测IGFBP4/SHBG双指标免疫层析试剂盒

说明书

本发明具体涉及一种同时检测胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGF‑binding protein 4，IGFBP4)和性激素结合球蛋白(Sex hormone‑binding globulin，SHBG)免疫层析试剂盒，主要成分为免疫层析试纸条，由PVC底板上依次粘贴样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸组成。其中结合垫吸附有IGFBP4抗体‑微球和SHBG抗体‑微球，硝酸纤维素膜固定IGFBP4抗体形成检测线1(T1线)，固定SHBG抗体形成检测线2(T2线)，固定抗IgG抗体形成质控线(C线)。本发明同时公开了IGFBP4抗体和SHBG抗体偶联微球过程。本发明用IGFBP4/SHBG免疫层析试剂盒，检测血液或其他体液中IGFBP4和SHBG浓度，用于预测先兆子痫(PE)，妊娠糖尿病(GDM)，宫内生长受限(IUGR)及胎儿早产(PTB)发生的风险。

技术领域

本发明属于免疫学领域，具体涉及制备出IGFBP4抗体-荧光微球和SHBG抗体-荧光微球，建立检测 IGFBP4/SHBG免疫层析试剂盒过程。

背景技术

异常胎盘发育与妊娠相关疾病的发生密切相关，包括先兆子痫(Preeclampsia，PE)，妊娠糖尿病 (Gestational diabetes mellitus，GDM)，宫内生长受限(Intrauterinegrowth restriction，IUGR) 及胎儿早产(Preterm birth，PTB)等。研究发现，绒毛外滋养细胞病理性侵入到母体蜕膜及子宫螺旋动脉构建缺陷，导致胎盘功能不全。胎盘组织表达胰岛素类生长因子(Insulin-like growth factors，IGFs)， IGFs对胎盘的正常发育起着重要作用，IGFs可增进表浅绒毛外滋养细胞侵润，运送营养成分，促进胎儿生长发育。IGFs生物活性学受到胰岛素样生长因子结合蛋白(IGF-binding proteins，IGFBPs)的调控，胎盘中主要表达IGFBP1和IGFBP4。胎盘中妊娠相关蛋白A(Pregnancy associated plasmaprotein A， PAPP-A)是IGFBP4的蛋白水解酶，降解IGFBP4而释放出生物活性IGFs。IGFBP4是6种IGFBP1-6之一， IGFBPs具有高度保守结构，包括N-端富含半胱氨酸区域、高度变异链接区和C-端GCGCCXXC。IGFBP4高亲和力结合IGFs，延长IGFs半衰期，改变IGFs与细胞表面受体的相互作用，并影响IGFs功能。孕早期血循环中IGFBP4水平升高的孕妇，其后PF，IUGR及PTB的发病率明显增高，血液中IGFBP4水平升高与妊娠相关疾病发生密切相关。

妊娠糖尿病(GDM)是一种常见的妊娠并发症，与增加产后妇女糖尿病发病率有关。对GDM患者进行早期诊断和治疗，改善GDM预后十分重要。对GDM诊断是用口服葡萄糖耐受试验。这种测试需要禁食至少8小时，需要3-4血液抽样，并要求2-3小时完成，需要开发一个简单，快速血液检测方法，预测GDM发生。研究发现，正常孕妇组血液中IGFBP4水平为22.78ng/ml，而GDM组血液中IGFBP4水平下降至14.79ng/ml，两组间有显著差异，p＜0.001，血液中IGFBP4水平下降与GDM发生有明显的相关性。

SHBG是由肝脏产生的糖蛋白，结合循环中的性激素，如雌二醇，二氢睾酮和睾丸激素，调节睾丸激素和雌二醇的生物利用度，影响葡萄糖代谢。循环中SHBG水平受雄激素/雌激素平衡状况、甲状腺激素、胰岛素和饮食因素的调节。

胰岛素和胰岛素样生长因子导致抑制SHBG分泌、在胰岛素抵抗状态下，检测到低水平SHBG，SHBG已被认为是胰岛素抵抗的标志物。流行病学研究发现男性血清睾丸激素降低与随后中央性肥胖、胰岛素浓度升高、代谢综合征和糖尿病之间存在关联，而女性血液中睾丸激素升高与葡萄糖不耐受和胰岛素抵抗密切相关，向糖尿病方向发展。研究表明，在肥胖、胰岛素抵抗、代谢综合征和T2MD病人群中，SHBG水平降低，循环中SHBG浓度成为是T2DM发展的潜在预测因子。