[发明专利]新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒

说明书

本发明提供了新型冠状病毒2019‑nCoV核酸检测试剂盒，具体的地，本发明公开了一种多重检测新型冠状病毒2019‑nCoV核酸的试剂盒及方法，能够同时检测新型冠状病毒2019‑nCoV的3个核酸靶标，可通过不同靶标之间相互验证，防止出现假阳性，对可能因突变而引起的漏检进行确认，显著提高了病毒鉴定的准确性。

技术领域

本发明属于生物技术和分子诊断领域，具体地说，本发明涉及用于检测新型冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合及试剂盒。

背景技术

冠状病毒在系统分类上属冠状病毒科（Coronaviridae）冠状病毒属（Coronavirus）。冠状病毒属的病毒是具外套膜的正链单股RNA病毒，直径约80～120nm，其遗传物质是所有RNA病毒中最大的，感染人、鼠、猪、猫、犬、狼、鸡、牛、禽类脊椎动物。冠状病毒的一个变种是引起非典型肺炎的病原体，属于RNA病毒。病毒颗粒的直径60～200nm，平均直径为100nm，呈球形或椭圆形，具有多形性。病毒有包膜，包膜上存在棘突，整个病毒像日冕，不同的冠状病毒的棘突有明显的差异。目前已知的可感染人的冠状病毒共7种分别是HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV、MERS-CoV和新型冠状病毒2019-nCoV。

新型冠状病毒2019-nCoV（SARS-CoV-2）属于β属的新型冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60-140nm。其基因特征与SARSr-CoV 和MERSr-CoV 有明显区别。

新型冠状病毒2019-nCoV为新发现病毒（基因序列参见GISAID：BetaCov/Wuhan/WH01/2019| EPI_ISL_406798），目前对于该病毒的诊断主要依靠临床症状、病毒分离培养和病毒核酸检测技术进行。临床症状可初步判定为疑似病例，病毒的确诊需要通过核酸检测阳性后方可确认。培养法具有较高的特异性和敏感性，但临床检测时间过长，过程繁琐，不适用于大范围检测。实时荧光PCR技术是在核酸反应管中加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时探针结合在DNA一条单链上，在Taq酶的5’－3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。荧光PCR技术是一种灵敏度、特异性和精密度更高的核酸检测技术，其检测结果准确，重复性高，能反应病原体变化，同时避免了传统PCR需后处理的问题，降低了污染的可能性。

市场上目前已有一些依据实时荧光定量PCR技术开发的核酸检测试剂盒，但多为单靶标检测试剂，缺乏多基因同时检测以对病毒进行确认，并且试剂性能差异较大，不利于病毒的检测与诊断。基于此，开发一套灵敏度高、特异性强、重复性好的产品用于新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测显得非常必要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒，以便能够高效率、高特异性、低成本的对新型冠状病毒2019-nCoV感染患者进行检测。

在本发明的第一方面，提供了一种用于多重检测新型冠状病毒2019-nCoV核酸的引物对集，所述引物对集包括：

第一引物对组，所述第一引物对组包括：

如SEQ ID NO.1所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.2所示的反向引物。

在另一优选例中，所述引物对集还包括：

第二引物对组，所述第二引物对组包括：

如SEQ ID NO.4所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.5所示的反向引物。

在另一优