[发明专利]改善的T细胞组合物

权利要求书

1.制备T细胞的方法，其包括：

a)活化T细胞群并刺激所述T细胞群增殖；

b)用包含编码抗B细胞成熟抗原(BCMA)嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸的病毒载体转导所述T细胞；

c)培养转导的T细胞以进行增殖；

其中，在存在磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂的情况下进行步骤a)-c)，和

其中，与在不存在所述PI3K抑制剂的情况下进行的根据步骤a)-c)制备的T细胞中的T细胞分化相比，在存在所述PI3K抑制剂的情况下进行的根据步骤a)-c)制备的所述T细胞中的T细胞分化减少。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述CAR包含胞外结构域，所述胞外结构域包含与以下结合的抗体或抗原结合片段：BCMA、铰链结构域、跨膜结构域、一个或多个共刺激结构域和初级信号转导结构域。

3.制备T细胞的方法，其包括：

a)激活T细胞群并刺激所述T细胞群增殖；

b)用包含编码抗BCMACAR的多核苷酸的病毒载体转导所述T细胞，其中所述CAR包含与以下结合的抗体或抗原结合片段：BCMA、IgG1、CD28或CD8α铰链结构域、CD28或CD8α跨膜结构域、CD28、OX40或4-1BB共刺激结构域和CD3δ初级信号转导结构域；

c)培养转导的T细胞以进行增殖；

其中，在存在磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂的情况下进行步骤a)-c)，和

其中，与在不存在所述PI3K抑制剂的情况下进行的根据步骤a)-c)制备的T细胞中的T细胞分化相比，在存在所述PI3K抑制剂的情况下进行的根据步骤a)-c)制备的所述T细胞中的T细胞分化减少。

4.如权利要求2或3所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段选自：骆驼Ig(骆驼科抗体(VHH))、Ig NAR、Fab片段、Fab’片段、F(ab)’2片段、F(ab)’3片段、Fv、单链Fv抗体(“scFv”)、双-scFv、(scFv)2、微型抗体、双功能抗体、三功能抗体、四功能抗体、二硫键稳定的Fv蛋白(“dsFv”)和单域抗体(sdAb，纳米抗体)。

5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述PI3K抑制剂是选自BEZ235、LY294002和GDC-0941的pan-PI3K抑制剂。

6.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述PI3K抑制剂是选自BYL719、GSK2636771、TGX-221、AS25242、CAL-101和IPI-145的选择性PI3K抑制剂。

7.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述PI3K抑制剂是PI3K抑制剂ZSTK474。

8.制备T细胞的方法，其包括：

a)激活T细胞群并刺激所述T细胞群增殖；

b)用包含编码抗BCMACAR的多核苷酸的病毒载体转导所述T细胞，其中所述CAR包含与以下结合的scFv：BCMA、CD8α铰链结构域、CD8α跨膜结构域、4-1BB共刺激结构域和CD3δ初级信号转导结构域；

c)培养转导的T细胞以进行增殖；

其中，在存在磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂的情况下进行步骤a)-c)，和

其中，与在不存在所述PI3K抑制剂的情况下进行的根据步骤a)-c)制备的T细胞中的T细胞分化相比，在存在所述PI3K抑制剂的情况下进行的根据步骤a)-c)制备的所述T细胞中的T细胞分化减少，其中所述PI3K抑制剂是ZSTK4。

9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述抗BCMA CAR还包含信号肽。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述信号肽包含IgG1重链信号多肽或CD8α信号多肽。

11.如权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述方法包括分离外周血单个核细胞作为T细胞的来源。