[发明专利]一种血浆EBV miR-BART8-3p的检测引物和探针及应用

说明书

本发明提供一种血浆EBV miR‑BART8‑3p的检测引物和探针及应用，属于基因治疗和医学诊断技术领域，具体提供引物和探针序列如SEQ ID NO.2‑4所示，本发明通过所述引物和探针建立了针对血浆中EBV miR‑BART8‑3p的检测方法，可以有效区分正常人和鼻咽癌患者血浆的表达，由此快速做出对鼻咽癌的诊断，本发明对于鼻咽癌的诊断、鼻咽癌患者的放疗疗效均有重要意义。

技术领域

本发明涉及基因治疗和医学诊断技术领域，具体涉及一种血浆生物学标志物EBVmiR-BART8-3p在鼻咽癌患者早期诊断、放疗疗效监测和预后预测的检测方法和应用。

背景技术

鼻咽癌是中国南方癌症相关死亡的重要原因。鼻咽癌对放疗非常敏感，早期鼻咽癌患者可通过调强放射治疗获得超过90％的5年生存率。 然而，超过70％的患者最初被诊断为局部晚期鼻咽癌，且仍有15％至30％的患者因远处转移导致治疗失败。因此，发现简单、有效的肿瘤标志物,以提高鼻咽癌早期诊断率和预测预后能力,是鼻咽癌未来防治的重点工作。鼻咽癌与EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)感染密切相关。因此，可通过检测EBV基因产物来协助鼻咽癌的诊疗。最早传统检测的是EBV抗体，尤其是VCA/IgA，然而VCA/IgA抗体的敏感性和特异性相对较低，而且在接受放疗后，患者体内的VCA/IgA抗体长时间内仍维持在高水平，价值有限。

目前，EBV-DNA是临床实践中常用的生物标志物。然而15%的鼻咽癌患者在确诊时EBV-DNA阴性；其次，各个实验室EBV-DNA检测技术和方法不同、EBV-DNA的定量和截值缺乏标准化，限制了其广泛应用。因此，研究鼻咽癌中的新型生物标志物具有重要意义。微小RNA（microRNA，miRNA）是一类高度保守的长度约为20～23个核苷酸的内源性小分子非编码RNA，可参与肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡、侵袭转移、免疫逃逸等过程。人鼻咽癌细胞产生两类miRNA：一类是人基因组产生的miRNA；另一类是 EBV基因组产生的miRNA（EBV miR）。EBV编码miRNA 的基因组位于BHRF1和 BART两个基因簇。目前研究发现EBV共编码 22个EBV-miR-BARTs前体，形成 44个成熟的miRNA，并且EBV-miR-BARTs大量表达于鼻咽癌组织中，而在正常人鼻咽组织几乎检测不到。然而，鉴于鼻咽癌患者的活检组织少，不易取得，副作用及风险较大，而血浆检测比较简单、方便且易于实施、普及，因此，如果能够通过检测血浆中EBV BARTs microRNA，并应用于鼻咽癌的早期诊断、放疗疗效预测及预后判断具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种血浆EBV miR-BART8-3p的检测引物和探针，通过检测血浆中EBV BARTs microRNA，并应用于鼻咽癌的早期诊断、放疗疗效预测及预后判断具有重要意义。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明所述的EBV miR-BART8-3p的序列如SEQ ID No.1所示，具体为GUCACAAUCUAUGGGGUCGUAGA。

还提供了一种血浆EBV miR-BART8-3p的检测引物和探针，其序列如下：

上游引物为miR-BART8-3p-F：5’- ATCGTCACAATCTATGGGGT-3’，

下游引物为miR-BART8-3p-R：5’- GCAGGGTCCGAGGTATTC-3’，

探针为：5’- CGCACTGGATACGACTCTACG - 3’，5’端标记的荧光报告基团是FAM，3’端标记的荧光淬灭基团是MGB。

通过所述引物和探针制备获得血浆EBV miR-BART8-3p检测试剂盒。

该试剂盒的检测方法是通过PCR技术检测生物样品中EBV miR-BART8-3p的表达量。

本发明的优点在于：