[发明专利]一种从七叶皂苷钠中分离制备一种微量成分的方法

说明书

本发明公开了一种从七叶皂苷钠中分离制备一种微量成分的方法，该方法包括以下两个步骤：1)将七叶皂苷钠原料药上大孔树脂柱，用乙醇进行洗脱，收集洗脱液并浓缩、干燥，然后再上硅胶柱进行层析，用氯仿和甲醇混合溶剂进行洗脱，收集含有目标成分的洗脱液，浓缩至干得粗品；2)将粗品连续进行两次制备液相色谱纯化，收集目标流分并进行浓缩、干燥，采用上述制备方法有效得到了该化合物的成分单体，为七叶皂苷钠的二次开发和效应物质研究提供了物质基础。本发明制备的单体化合物纯度高达95％以上，产物收率达1.5％左右，具有很好的产业化生产前景。

技术领域

本发明涉及一种从七叶皂苷钠原料药中分离制备一种微量成分的方法，属于制药领域。

背景技术

七叶皂苷钠是一种天然药物，是从七叶树科七叶树属植物的种子娑罗子中提取得到的总皂苷钠盐，临床上具有抗脑水肿，抗炎作用，主要用于治疗慢性静脉功能不全。七叶皂苷钠依据液相色谱分析出峰先后(见附图1)，将其主要活性成分依次命名为七叶皂苷A、B、C、D，但七叶皂苷钠中也包含很多其它微量成分。

在天然植物药现代化的热潮下，基于成分的复杂多样性，这些除七叶皂苷A、B、C、D以外的其它成分在天然药物的二次开发中显得尤为重要，其中不乏具有显著生物活性的很多新物质。另外，阐述七叶皂苷钠的效应物质基础，提升药物质量标准也是天然植物药走向国际化认证的重要前提，这也就要求对七叶皂苷钠中的成分单体进行有效的制备分离，得到大量的单体成分，为后续质量和药理毒理研究提供物质基础。

目前，根据中国药典中提供的检测七叶皂苷钠的HPLC色谱方法，只是在分析柱上定量定性分析原料药，进样量非常小，无法放大到制备柱上进行单体制备，另外由于这些微量成分在七叶皂苷钠中的含量非常低，很难有效地获得高纯度的产物，或者以非常高的成本获得少量的产物，无法满足中试放大生产的需要。因此大多文献如CN102020691，CN102532242报导的都是制备七叶皂苷A、B、C、D单体的方法，对于制备七叶皂苷钠中含量很少的微量成分目前还没有有效的制备方法，尤其是针对其中常规HPLC分析检测下分离度较差的成分，更具有难度。

发明内容

本发明的目的是提供一种从七叶皂苷钠中分离制备一种微量成分的方法。

一种从七叶皂苷钠中分离制备一种微量成分的方法，所述微量成分的化学结构式如下：

该方法包括以下两个步骤：

1)将七叶皂苷钠原料药上大孔树脂柱，用乙醇进行洗脱，收集洗脱液并浓缩、干燥，然后再上硅胶柱进行层析，用氯仿和甲醇混合溶剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩至干得粗品；

2)将粗品连续进行两次制备液相色谱纯化，收集目标流分并进行浓缩、干燥。

优选地，所述大孔树脂是CHP20P型。

优选地，所述乙醇洗脱，包括先用30～45％乙醇洗脱，再用50～70％乙醇洗脱两个步骤，收集50～70％乙醇洗脱液。

优选地，所述氯仿与甲醇的体积比为1～5：1。

优选地，所述两次制备液相色谱纯化所使用的色谱柱均是反相色谱柱，色谱柱的填料均为聚苯乙烯/二乙烯基苯聚合物，流动相为体积比60～70：40～30的甲醇与0.5～2‰甲酸混合溶液，均采用等度洗脱，检测波长200-230nm。

优选地，其中第一次纯化所使用的填料粒径10～15μm，孔径300～500A，第二次纯化所使用的填料粒径3～5μm，孔径100～300A。

优选地，其中第一次纯化的洗脱时间100～150min，流速20～50mL/min，第二次纯化的洗脱时间70～90min，流速5～15mL/min。