[发明专利]一种基于微乳的疫苗递送系统及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种基于微乳的疫苗递送系统，并提供其制备方法和应用。本发明的微乳通过吸附一系列金属离子化合物，并在制备的过程中加入抗原即可实现抗原包载得到稳定的疫苗制剂。本发明制备的疫苗可以高效地被抗原呈递细胞摄取，有效地传递到淋巴结并诱导抗原特异性的免疫反应，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种基于微乳的疫苗递送系统及其制备方法，属于医药技术领域。

背景技术

疫苗接种是现代医学的最伟大发明之一，也是许多疾病预防和根除的有效手段，用于控制多种感染性疾病。疫苗发展的三个重要方向包括：新抗原的发现、新的佐剂技术及新的载体平台。

传统减毒活疫苗和灭活疫苗本质上可能包含自然佐剂成分，其中可能包括颗粒形式的蛋白质、脂质和寡核苷酸。但是由于这些减毒和灭活疫苗本身的一些局限性，如减毒的病原微生物突变成强致病的微生物，灭活疫苗在制备中没有灭活完全，当这些疫苗作用于机体，可能会直接导致机体致病。亚单位疫苗是指通过化学分解、重组表达等手段，提取病原微生物具有免疫活性的片段而制成的疫苗。相对于灭活疫苗及减毒活疫苗，亚单位疫苗具有安全性更高、稳定性更好、可规模化生产等优势，成为现代疫苗开发和应用的主要趋势。但是亚单位疫苗也有免疫原性弱、保护作用时间短、起效慢等缺点，为弥补亚单位疫苗的这些缺点，在亚单位疫苗中广泛使用了佐剂。使用疫苗递送载体，能够提高免疫应答水平和改善疫苗制剂的稳定性。在过去十年中，纳米级(1000nm)材料，如脂质体、ISCOMS、聚合物和可降解的纳米球，纳米粒等，作为疫苗抗原的递送载体而受到人们的关注，这种载体既可以稳定疫苗抗原，避免抗原的降解，其本身也有一定的佐剂效果，可以提高抗原在体内的免疫应答水平。

乳剂作为人类和动物疫苗的佐剂已有很长的历史。弗氏佐剂(Freund’sadjuvant)，由美籍匈牙利细菌学家Freund于1935年研究成功，他首次证明了矿物油(石蜡)与分枝杆菌结合具有佐剂效应，这种佐剂被称为“弗氏完全佐剂”。而不含细菌的油包水(w/o)乳剂(弗氏不完全佐剂)随后用于兽医疫苗。虽然像弗氏不完全佐剂这样的乳剂也曾用于人类，其中包括流感病毒疫苗，但它们易引起不良反应。采用可降解油相角鲨烯替代矿物油而制成的水包油乳剂MF59，其佐剂化的流感疫苗已于1997年在欧盟批准上市，并且迄今已在30多个国家得到批准。现已在美国和欧洲临床批准使用的乳剂型佐剂还包括AS03和AF03。

金属离子化合物类佐剂具有极广的应用，其中铝盐，钙盐，锌盐，铁盐和锆盐经常作为抗原吸附剂。铝盐佐剂在疫苗中是应用较广的佐剂，包括硫酸钾铝、磷酸铝和氢氧化铝等，这种佐剂使抗原滞留，缓慢释放，并可引起局部炎症反应，从而吸引活性淋巴细胞，增强免疫应答，还可以增强补体系统，铝佐剂主要引起体液免疫应答而非细胞免疫应答；磷酸钙佐剂在法国已成功的用于白百破、小儿麻痹、卡介苗、麻疹、黄热病、乙肝、HIV的糖蛋白等疫苗的配制，其佐剂作用可能与铝佐剂相似，而钙是人体的天然结构成分，机体对其有很高的耐受性；氢氧化铁佐剂可以同时增强机体体液免疫和细胞免疫反应，因此将来可能会在疫苗的免疫佐剂应用中占有一席之地；氢氧化锌胶体单独或与ATP联合使用均能一定程度上增强对狂犬病毒抗原的免疫应答，加之锌元素的毒副作用极低，其开发应用也极具潜力。

在这里，我们将金属离子化合物吸附于微乳表面，促使其比表面积急剧增大，具有表面反应活性高、活性中心多、吸附能力强等特性，在相同金属离子化合物含量的情况下，可吸附更多的抗原，从而制成纳米级别颗粒用于疫苗递送。

发明内容

本发明的目的之一是提供一种由金属离子化合物、抗原和微乳形成的疫苗递送系统，其中金属离子化合物被微乳吸附。本发明通过高压均质、超声、高速搅拌等方法制备微乳，将金属离子化合物吸附于乳剂表面，再加入不同的抗原成分制成疫苗。本发明制备的疫苗可以将抗原运送至淋巴结，被抗原呈递细胞高效地摄取，并诱导抗原特异性的免疫反应。