[发明专利]一种花生组培苗芽伸长培养基及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种花生组培苗芽伸长培养基及其制备方法和应用，属于农作物生产技术领域。本发明所述花生组培苗芽伸长培养基包括混合溶液和凝固剂，每1L混合溶液包括4～4.8g的MS Medium培养基，25～35g蔗糖，0.2～0.3mL的15～25mmol/L的6‑苄基腺嘌呤溶液，0.05～0.15mL的8～12mmol/L的赤霉素溶液和水；所述凝固剂包括Phytagel植物凝胶和/或琼脂。本发明提供的花生组培苗芽伸长培养基具有良好的促花生组培苗芽伸长作用。经芽伸长培养1个月后：经转基因处理的丛生芽伸长率可达到4.11；未经转基因处理的丛生芽伸长率可达到4.89。

技术领域

本发明属于农作物生产技术领域，具体涉及一种花生组培苗芽伸长培养基及其制备方法和应用。

背景技术

花生组织培养对花生的品种改良、新品种繁殖、遗传转化、种质保存和抗性突变体的筛选等具有重要意义。由于花生的再生难度较大且有基因型特异性，研究进展较为缓慢，特别是如何建立高效、稳定、能够连续获得再生植株的体系仍需要更进一步研究。

花生组织培养中丛生芽的伸长直接关系到丛生芽诱导到根诱导的时间和转接成活率，是一个非常关键的步骤。花生组织培养有四个关键时期，其中丛生芽伸长大约占生长周期1/4的时间。刚诱导出的丛生芽幼小，节间短，在芽诱导培养基中生长缓慢，需要接种到芽伸长培养基中进行增殖和伸长，才能得到正常植株。如不能实现芽的伸长生长，小芽极易干枯死亡。芽能否很好的伸长生长直接决定了组培苗的生根状况。目前花生组培丛生芽伸长困难，伸长速度慢，增殖系数低，伸长率低。叶片易黄化脱落，基部组织褐化，芽苗枯死，植株再生率低，缺少一套高效稳定的丛生芽伸长方法。

发明内容

有鉴于背景技术中的问题，本发明的目的在于提供一种花生组培苗芽伸长培养基及其制备方法和应用，提高花生组培苗的丛生芽伸长率。

本发明提供了一种花生组培苗芽伸长培养基，包括混合溶液和凝固剂，每1L混合溶液包括4～4.8g的MS Medium培养基，25～35g蔗糖，0.2～0.3mL的15～25mmol/L的6-苄基腺嘌呤溶液，0.05～0.15mL的8～12mmol/L的赤霉素溶液和水；所述凝固剂包括Phytagel植物凝胶和/或琼脂。

优选的，每1L混合溶液包括4.4g的MS Medium培养基，30g蔗糖，0.25mL的20mmol/L的6-苄基腺嘌呤溶液，0.1mL的10mmol/L的赤霉素溶液和水。

优选的，每1L混合溶液中添加凝固剂2～8g。

优选的，每1L混合溶液中添加2～4g的Phytagel植物凝胶和0.4～1.2g琼脂。

本发明还提供了上述芽伸长培养基的制备方法，包括如下步骤：

(1)将MS Medium培养基、蔗糖、6-苄基腺嘌呤溶液和赤霉素溶液混合，得到基础混合物；

(2)将所述基础混合物与水混合，得到混合溶液；

(3)将所述混合溶液与凝固剂混合，灭菌，得到芽伸长培养基。

优选的，步骤(1)得到基础混合物后，用试剂调节所述基础混合物的pH值为5.6～6.0。

优选的，所述试剂为1mol/L的NaOH溶液。

优选的，步骤(3)所述灭菌采用高温高压灭菌；所述灭菌的压力为90～110kpa；所述灭菌的温度为118～125℃。

优选的，步骤(3)所述灭菌后，向灭菌物料中添加头孢噻肟和/或潮霉素；所述头孢噻肟的添加量为：每1L灭菌物料添加400～600μL的400～600mol/L的头孢噻肟；所述潮霉素的添加量为：每1L灭菌物料添加0.5～1.5mL的40～60mg/mL的潮霉素。

本发明还提供了上述芽伸长培养基在花生组培苗种植中的应用。