[发明专利]含庚糖链的寡糖化合物在制备幽门螺旋杆菌疫苗中的应用

说明书

本发明公开了含庚糖链的寡糖化合物在制备幽门螺旋杆菌疫苗中的应用，属于医药领域。本发明通过化学合成得到的不同抗原糖链片段，并固定于芯片表面制备得到合成寡糖芯片，结合动物免疫实验和合成寡糖芯片分析，利用抗血清中针对多糖产生的抗体进行检测，探究合成寡糖与免疫原性的关系。本发明探究得到抗原中庚糖链为重要免疫表位，即含有α‑(1→3)庚糖链的糖抗原片段具有优异的免疫活性，可用于制备、开发预防和治疗幽门螺旋杆菌感染的疫苗。

技术领域

本发明涉及含庚糖链的寡糖化合物在制备幽门螺旋杆菌疫苗中的应用，属于医药领域。

背景技术

幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)是一种微需氧型的革兰氏阴性致病菌，作为最广泛的细菌病原体之一，在世界人口的感染率约为50％(J.G.Kusters et al.,ClinMicrobiol Rev,2006,19:449)。研究表明，幽门螺旋杆菌是引发胃炎、胃萎缩、消化性和十二指肠溃疡等疾病的主要病因(B.Molnar et al.,Dig Dis,2010,28:604)。另外，由于幽门螺旋杆菌的感染与增加患胃癌的风险直接相关(L.E.Wroblewski et al.,Clin MicrobiolRev,2010,23:713；C.Prinz et al.,World J Gastroenterol,2006,12:5458)，所以在1994年，世界卫生组织(WHO)明确将其归类为I型人类致癌因子(Lyon:IARC,1994,61:177)。研究表明，幽门螺旋杆菌的感染使患胃癌的风险增加了2-8倍(Helicobacter and CancerCollaborative Group,Gut,2001,49:347；F.Kamangar et al.,J Natl Cancer Inst,2006,98:1445)。

目前，针对幽门螺旋杆菌感染的治疗主要是以铋剂或质子泵抑制剂联合使用抗生素的三联或四联疗法。但是，基于抗生素(以克拉霉素为主)的治疗存在许多弊端，长期使用抗生素不仅导致了细菌耐药性的产生(G.Ayala et al.,World J gastroenterol,2014,20:1450；N.Vakil,Cancer J Gastroenterol,2003,17:30B)，而且基于抗生素的治疗并不能阻止幽门螺杆菌重复感染的风险，因此迫切需要开发新的疗法用于幽门螺杆菌的治疗。而幽门螺杆菌疫苗被认为是控制这一全球性感染疾病最有效的方法(M.Selgrad et al.,Curr Opin Pharmacol,2008,8:593)。虽然研究人员已经对抗幽门螺旋杆菌疫苗的研发做出了许多努力，例如2009年由尿素酶B亚基和不耐热肠毒素B亚基组成的融合蛋白疫苗在中国获得许可(M.Zeng et al.,Lancet,2015,386:1457)，但迄今为止，尚未有针对幽门螺杆菌感染的疫苗成功上市。脂多糖(LPS)O-抗原作为幽门螺杆菌细胞表面的主要成分，被认为是极具吸引力的疫苗候选物(S.Yu et al.,Infection and Immunity,2007,75:2974；D.Ren et al.,Vaccine,2011,29:4210)。研究表明发展糖类疫苗抵抗幽门螺旋杆菌的感染是非常合理的，以糖类为基础的缀合疫苗已经成功地用于防止系统性感染和抑制宿主定植(J.H.Passwell et al.,Infection and Immunity,2001,69:1351)。然而由于提取得到的脂多糖存在结构不够专一，并且容易附带结构类似杂质的特点，实验重复性差，限制了后续的疫苗治疗方面的应用。因此，开发一种结构专一且可明确化学合成，同时还能够具有优异的抑制幽门螺旋杆菌的效果的疫苗是具有迫切需求的。

发明内容

本发明克服糖类结构的结构性能多样性和难以预期性，基于化学合成的手段获得表面糖抗原寡糖，通过氨基连接臂将合成寡糖固定于芯片表面制备合成寡糖芯片，通过动物免疫获得多糖免疫的抗血清，通过合成寡糖芯片对其抗体组成和滴度进行分析，从分子水平分析其免疫表位，探究了各种表面寡糖链与免疫活性的构效关系。为制备、开发预防和治疗幽门螺旋杆菌感染的疫苗提供合成糖抗原。