[发明专利]一种内源性长链非编码RNA MRAK049966及其应用

说明书

本发明公开了一种内源性长链非编码RNA MRAK049966及其应用。具体是指所述的长链非编码RNA MRAK049966在制备治疗或者缓解慢性疼痛的药物中的应用。而治疗或者缓解慢性疼痛的药物是指抑制吗啡耐受的药物。该长链非编码RNA MRAK049966是首次报道的全新长链非编码RNA，并被证实与吗啡耐受相关。本发明为治疗或者缓解慢性疼痛，减缓或者逆转吗啡耐受的形成提供了新的途径，具有重要的医学意义。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域。本发明涉及一种内源性的长链非编码RNA及其应用，尤其涉及内源性的长链非编码RNAMRAK049966及其在制备用于治疗吗啡耐受的药物中的应用。

背景技术

吗啡作为一种经典的阿片类镇痛药物，广泛应用于临床急慢性及中重度疼痛治疗。吗啡长期使用引起的耐受、成瘾、痛觉过敏及便秘、呼吸抑制等不良反应，明显限制了临床上吗啡的应用。其中，吗啡耐受(Morphine tolerance,MT)是吗啡应用受限的一个重要因素。到目前为止，吗啡耐受的机制尚不完全清楚，临床上仍然缺乏有效的防治措施。因此，探明吗啡耐受的发病机制寻找安全有效的防治方法是慢性疼痛领域值得研究的热点。

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是指核苷酸链长度大于200bp的非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)，可通过调节组蛋白修饰、染色质重塑、蛋白质功能活性及RNA代谢等，对基因表达在表观遗传水平、转录水平和转录后水平进行顺式或反式调控，与人类遗传性疾病及神经系统发育和一些重大疾病的发生发展密切相关。lncRNA调控基因表达是通过机体的内源性调控通路，具有更高的稳定性和组织相容性，更低的毒副作用，可能成为新的治疗策略。最近有报道脊髓水平的lncRNA参与调控慢性疼痛，但目前尚无lncRNA参与吗啡耐受形成具体机制的相关研究。由于吗啡耐受与疼痛有相似的信号传导通路，也有研究发现不少微小RNA(如miRNA)参与调控了吗啡耐受的形成，而lncRNA作为ncRNA中最主要的组成部分，极有可能也参与吗啡耐受的发生发展。

已有众多研究报道lncRNA参与包括肿瘤、神经系统发育、可塑性等在内的多种病理生理过程。本发明首次在慢性吗啡耐受大鼠脊髓腰膨大中筛选出一些差异表达的lncRNA，并通过GO、KEGG数据库进行进一步的功能预测，发现其功能可能主要富集在免疫防御、细胞因子、疼痛介质、离子通道、TNF代谢途径等生物过程，而这些生物过程很可能是构成吗啡耐受的生物基础。

进一步研究发现lncRNA MRAK049966在吗啡耐受大鼠脊髓背角中的表达明显上调，行为学结果显示，在大鼠吗啡耐受形成前鞘内注射MRAK049966的小干扰RNA(smallinterfering RNA，siRNA)减缓了吗啡耐受的形成，在吗啡耐受形成后鞘内注射MRAK049966的siRNA部分逆转了已经形成的吗啡耐受。

发明内容

本发明的首要目的是提供一种新的内源性长链非编码RNA MRAK049966，其cDNA序列如SEQ ID NO.1所示。该长链非编码RNA MRAK049966是首次报道的全新长链非编码RNA，并被证实与吗啡耐受相关。

本发明的长链非编码RNA MRAK049966是由大鼠长链非编码RNA芯片(上海康成公司)筛选的，在吗啡耐受大鼠脊髓组织中表达明显上调的非编码RNA：首先用Arraystar RNAFlash Labeling Kit标记标本(探针序列：ATGTGCCTGTCCATTGTCCCAGAGATTCTGTGATCTATTATGCTGCAATGTGT AATTTCT，见SEQ ID NO.2)，再用Agilent SureHyb进行杂交实验，完成芯片洗涤后用Agilent DNAMiarray Scanner扫描并统计结果。基因芯片结果发现长链非编码RNAMRAK049966是位于5号染色体上的基因间的非编码RNA，见图1A，在吗啡耐受大鼠脊髓组织中表达显著上调。见图1B。