[发明专利]一种用于快速鉴别新型冠状病毒的引物组、探针以及试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种用于快速鉴别新型冠状病毒的引物组和探针，其特征在于，所述引物组和探针的核苷酸序列如下所示：

上游引物SARS-CoV-2-F1：5’AGTCTCTAGTCAGTGTGTTAATCTTACAA3’(SEQ ID NO：1)；

下游引物SARS-CoV-2-R1：5’Biotin-TTCGCACTAGAATAAACTCTGAACTCACTT 3’(SEQ IDNO：2)；

荧光探针SARS-CoV-2-P1：5’[FAM]TTCCATGCTATACATGTCTCTGGGACCAAT[THF]GGTACTAAGAGGTTT[C3-spacer]3’(SEQ ID NO：3)。

2.一种快速鉴别新型冠状病毒的RPA试纸条试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1中所述的引物组和探针。

3.根据权利要求2所述的一种快速鉴别新型冠状病毒的RPA试纸条试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含RNA提取试剂、反转录试剂、RPA扩增试剂和侧向流动试纸条。

4.根据权利要求2所述的一种快速鉴别新型冠状病毒的RPA试纸条试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含醋酸镁、ddH₂O、5×Extration Buffer。

5.一种利用权利要求1引物组和探针快速鉴别新型冠状病毒的RPA-LFD检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)提取待测样品RNA；

(2)将步骤(1)中的RNA反转成cDNA；

(3)以步骤(2)中的cDNA为模板，用所述引物组和探针对样品进行RPA扩增反应，获得扩增产物A1；

(4)将扩增产物A1与5×Extration Buffer反应，获得产物B1；

(5)将产物B1滴加至侧向流动试纸条的加样孔，进行LFD反应，观察结果。

6.根据权利要求5所述的一种快速鉴别新型冠状病毒的RPA-LFD检测方法，其特征在于，步骤(5)中所述观察结果的方法为：

当试纸条检测区显色，且质控区也显色，则待测样品中的病毒为新型冠状病毒；

当试纸条检测区不显色，且质控区显色，则待测样品中的病毒不是新型冠状病毒；

当质控区不显色，则试纸条无效，需要用新的试纸条重新测定。

7.根据权利要求5所述的一种快速鉴别新型冠状病毒的RPA-LFD检测方法，其特征在于，步骤(3)的具体方法为：

取浓度均为10μmol/L的上游引物、下游引物各2.1μL，浓度为10μmol/L的探针0.6μL，Rehydration Buffer 29.5μL，RNase Inhibitor的ddH₂O 12.2μL，cDNA模板1μL，混合后加入RPA酶管中震荡混匀，再加入2.5μL的醋酸镁，然后将反应体系置于37℃水浴锅中反应20min，不需要经过高温变性、退火、延伸，反应得到扩增产物A1。

8.根据权利要求7所述的一种快速鉴别新型冠状病毒的RPA-LFD检测方法，其特征在于，所述RPA酶管包含有重组酶uvs X、单链结合蛋白和DNA聚合酶。

9.根据权利要求5所述的一种快速鉴别新型冠状病毒的RPA-LFD检测方法，其特征在于，步骤(4)中扩增产物A1的体积为10μL；5×Extration Buffer的体积为80μL。

10.根据权利要求5所述的一种快速鉴别新型冠状病毒的RPA-LFD检测方法，其特征在于，步骤(5)中产物B1的体积为75μL，加样至加样孔中5min内读取结果。