[发明专利]一步法检测犬腹泻病毒的引物对、TaqMan探针及方法与应用有效
| 申请号： | 202010290281.4 | 申请日： | 2020-04-14 |
| 公开（公告）号： | CN111763766B | 公开（公告）日： | 2022-12-27 |
| 发明（设计）人： | 粟硕;王茹怡;张文艳;潘中洲;李改茹 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 马严龙 |
| 地址： | 210095 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一步法 检测 腹泻 病毒 引物 taqman 探针 方法 应用 | ||
1.一种多重荧光定量PCR检测犬腹泻病毒的引物对和TaqMan探针组合，其特征在于，所述犬腹泻病毒为犬细小病毒、犬冠状病毒、犬库布病毒和犬星状病毒；检测犬细小病毒的引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，TaqMan探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：3；检测犬冠状病毒的引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5，TaqMan探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：6；检测犬库布病毒的引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：7和SEQ IDNO：8，TaqMan探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：9；检测犬星状病毒的引物对的核苷酸序列为SEQ ID NO：10和SEQ ID NO：11，TaqMan探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：12。
2.基于权利要求1所述的引物对和TaqMan探针组合对犬腹泻病毒检测的方法，所述方法为非疾病诊断治疗目的，其特征在于，具体步骤如下：步骤1，抽提病料中所含的RNA和DNA混合模板，并进行反转录，反应结束后获得DNA和cDNA混合模板；步骤2，利用权利要求1所述的引物对和TaqMan探针组合进行多重荧光定量PCR反应；步骤3，进行结果判定。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1中反转录反应条件为25℃5min，42℃60min,70℃5min。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2中PCR反应体系为20μl，包括：10μl 2×qPCR Probe Master Mix，引物均为0.4μL，Taqman探针均为0.1μL，ddH2O 0.4μL，混合模板6μL。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2中PCR反应条件为：先95℃预变性5min；然后95℃变性10s，56℃退火10s，72℃延伸30s，总共进行40个循环。
6.基于权利要求1所述的引物对和TaqMan探针组合在制备多重荧光定量PCR检测犬腹泻病毒试剂盒中的应用，其特征在于，所述犬腹泻病毒为犬细小病毒、犬冠状病毒、犬库布病毒或犬星状病毒。
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