[发明专利]一种用于食管鳞癌上皮细胞的培养基、培养方法及其应用

权利要求书

1.一种用于培养原代食管鳞癌上皮细胞的原代细胞培养基，其特征在于：

含有0.75μM～6μM的MST1/2激酶抑制剂和2.5μM～15μM的ROCK激酶抑制剂，所述MST1/2激酶抑制剂包括式(I)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂化物，所述ROCK激酶抑制剂选自Y27632、法舒地尔和H-1152中的至少一种，

其中，

R₁选自C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C4-C8环烷基烷基、C2-C6螺环烷基、以及任选地被1-2个独立地R₆取代的芳基、芳基C1-C6烷基和杂芳基；

R₂和R₃各自独立地选自C1-C6烷基；

R₄和R₅各自独立地选自氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C4-C8环烷基烷基、C1-C6烷基羟基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷基氨基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基和C3-C6杂环基C1-C6烷基；

R₆选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基和C1-C6卤代烷基。

2.如权利要求1所述的原代细胞培养基，其中

R₁选自C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C4-C8环烷基烷基、C2-C6螺环烷基、以及任选地被1-2个独立地R₆取代的苯基、萘基、苯甲基和噻吩基；

R₂和R₃各自独立地选自C1-C3烷基；

R₄和R₅各自独立地选自氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C4-C8环烷基烷基、C1-C6烷基羟基、C1-C6卤代烷基、C1-C6烷基氨基C1-C6烷基、C1-C6烷氧基C1-C6烷基、哌啶基C1-C6烷基和四氢吡喃基C1-C6烷基；

R₆选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基和C1-C6卤代烷基。

3.如权利要求1所述的原代细胞培养基，其中所述MST1/2激酶抑制剂包括式(Ia)的化合物或其药学可接受的盐或溶剂化物，

其中，

R₁选自C1-C6烷基、任选地被1-2个独立地R₆取代的苯基、任选地被1-2个独立地R₆取代的噻吩基和任选地被1-2个独立地R₆取代的苯甲基；

R₅选自氢、C1-C6烷基和C3-C6环烷基；

R₆各自独立地选自卤素、C1-C6烷基和C1-C6卤代烷基。

4.如权利要求3所述的原代细胞培养基，其中

R₁为任选地被1-2个独立地R₆取代的苯基；

R₅为氢；

R₆为氟、甲基或三氟甲基。

5.如权利要求1所述的原代细胞培养基，其中所述MST1/2激酶抑制剂选自以下化合物或其药学可接受的盐中的至少一种：

6.如权利要求1～5中任一项所述的原代细胞培养基，其特征在于：所述MST1/2激酶抑制剂的含量为2μM～6μM。

7.如权利要求1～5中任一项所述的原代细胞培养基，其特征在于：

所述ROCK激酶抑制剂在培养基中的含量为7.5μM～12.5μM。

8.如权利要求1～5中任一项所述的原代细胞培养基，其特征在于：

还含有以下因子中的一种或多种：表皮生长因子；胰岛素-转铁蛋白-硒复合物；B27添加剂或N2添加剂；肝细胞生长因子；TGFβI型受体抑制剂；和P38/MAPK抑制剂。