[发明专利]一种单克隆抗体对帕金森病的治疗作用

说明书

本发明涉及一种单克隆抗体对帕金森病的治疗作用，所述单克隆抗体为抗丝氨酸129位磷酸化alpha突触核蛋白(p‑α‑synuclein,p‑α‑syn)单克隆抗体(C140S)，本发明特别涉及此抗体在治疗免疫细胞异常激活的作用研究。

技术领域

本发明涉及一种单克隆抗体对帕金森病的治疗作用，所述单克隆抗体为抗丝氨酸129位磷酸化alpha突触核蛋白(p-α-synuclein,p-α-syn)单克隆抗体(C140S)，本发明特别涉及此抗体在治疗免疫细胞异常激活的作用研究。

背景技术

帕金森病(Parkinson`s Disease,PD)是一种常见的神经退行性疾病，主要表现为行动迟缓、肌僵直、静止性震颤和姿势不稳等运动症状，同时其他神经调节和神经递质系统也受到影响，导致各种非运动性症状，例如认知能力降低、抑郁、睡眠紊乱、嗅觉障碍，排尿和胃肠道异常等症状；帕金森病的发病机制尚不完全清楚，主要病理学特征是在中脑黑质中多巴胺能神经元细胞进行性死亡，在神经细胞中α-突触核蛋白(α-syn)聚集形成路易小体，其主要成分为丝氨酸129位磷酸化alpha突触核蛋白(p-α-syn)。

PD目前的治疗方法主要是药物治疗，药物治疗中最经典药物的是左旋多巴，但是左旋多巴只能改善运动症状，此类药物随着使用时间的延长和剂量增大，毒副作用越来越大，大多数PD患者出现疗效减退和“开-关”现象,另一类药物是酶的抑制剂比如MAO-B抑制剂，可以通过特异性抑制单胺氧化酶B起到减少多巴胺代谢的作用，但是部分患者会出现不自主运动等副作用。深部脑刺激(DBS)治疗是针对病人的震颤症状，使用一定频率的电信号刺激丘脑底核，从而起到缓解运动障碍的目的。这些治疗方法均是针对运动症状的治疗，无法真正延缓疾病的进程，并且对于疾病的适应症有一定的局限性，因此针对病因特异性较强的免疫疗法显示出它的优势。抗体作为药物可以靶向识别引起疾病发生的目标蛋白，促进目标蛋白清除，减少目标蛋白聚集和阻止目标蛋白的传播从而起到治疗的作用。

对于帕金森病来说免疫疗法治疗的目标蛋白就是α-突触核蛋白。α-突触核蛋白异常的聚集形式以及磷酸化修饰都可以引起细胞毒性，并在细胞间传播，进而引起细胞死亡，引发帕金森病。目前针对α-syn的抗体有针对不同聚集状态的α-syn的抗体(抗单体，抗寡聚体，抗纤维化抗体)；α-syn分为三个结构域，N端，NAC区及C端，所以也有针对识别α-syn不同区域的抗体(抗N端,抗C端,抗NAC区抗体)，但是目前均没有应用到临床上。而α-突触核蛋白发挥毒性作用主要与它的磷酸化修饰有关，丝氨酸129位磷酸化的alpha突触核蛋白对细胞的损伤更大，更其易于聚集和传播，使其更难被降解，从而引起细胞毒性和神经退行性变化。使用特异抗丝氨酸129位磷酸化alpha突触核蛋白单克隆抗体中和毒性蛋白，从而减轻其细胞毒性是一种新的针对病因的治疗方法。

抗丝氨酸129位磷酸化alpha突触核蛋白(p-α-synuclein,p-α-syn)单克隆抗体(简称：C140S)：公开在中国专利ZL201610913085.1中，该专利说明书中描述了该抗体的来源：为建立本发明所述的ELISA检测方法，特制备了一种针对129位磷酸化的人源α-syn的小鼠源单克隆抗体C140S，该单克隆抗体的制备方法如下：使用P1(M18631-1hz-1-1,Ac-CEAYEMP(pS)EGG-NH2,人源129位丝氨酸磷酸化α-syn的123-131肽段)肽段免疫balb-c小鼠，取脾制备融合骨髓瘤细胞系，间接法ELISA筛选出克隆号为C140S的细胞系，使用该细胞系注射入4只balb-c/nu小鼠腹腔，间接法ELISA验证腹水反应特异性后纯化抗体，再次使用间接法ELISA验证纯化的抗体的反应性后(即0.125ug/ml的抗体识别1000ng/ml的阳性组490nm波长吸光光度值高于阴性组至少30倍，且背景和阴性组读数小于0.2)，方可用作本方法中的检测抗体，最终浓度为4mg/ml。

(该细胞株已经保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，编号为CGMCC12993，保藏日期16年9月26日，分类命名：抗体杂交瘤细胞，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号)。

发明内容