[发明专利]一种昆虫浅色触角内淋巴管可视化的方法

权利要求书

1.一种昆虫浅色触角内淋巴管可视化的方法，包括以下步骤：

步骤1)活体触角的分离：先将50ml Ringer液倒入100ml烧杯中，在Ringer液中持续充入气体；在一个凹孔型载玻片上滴上几滴Ringer液，随后在体式显微镜下，在载玻片上的Ringer液中用眼科剪在昆虫触角根部剪下触角，然后使用Ringer液清洗3遍离体触角；

步骤2)组织固定：用尖头镊子轻轻地将触角转移到一个干净的PCR管中，滴上2-4滴浓度5％的甲醛溶液，固定10分钟后除去该甲醛溶液；然后再滴上2-4滴浓度10％的甲醛溶液，再固定10分钟；最后用干燥的滤纸条吸除多余的甲醛溶液；

步骤3)组织脱水：用尖头镊子将组织固定后的昆虫触角转移到另一个干净的PCR管中，依次用70％、80％、90％、100％浓度的酒精进行四次脱水，每次脱水时间为5分钟；

步骤4)姿态固定与显影：使用细镊将步骤3)处理过的昆虫触角以水平姿态固定在载玻片上的小井装置中，并进行姿态微细调整和固定，然后滴入液体M；同时在体式显微镜下保持时刻观察，1-2分钟内，触角内淋巴管在显微镜视野下逐渐显色；

步骤5)整体拍照：立即置于不同倍率的常规光学显微镜下，观察并采集完成完整触角内淋巴管的图像信息；

步骤4)中所述的液体M的折射率控制在1.5±0.1之间，所述的液体M为水杨酸甲酯、甲苯、二甲苯、氯仿、香柏油中的任意一种；

该方法能够在不使用示踪剂、不进行切片处理，仅使用普通的生物级显微镜的条件下，在成虫触角上实现完整触角内淋巴管的原位可视化。

2.根据权利要求1所述的昆虫浅色触角内淋巴管可视化的方法，其特征在于：步骤1)中，所述的烧杯埋于冰中，以保持Ringer液冰冷。

3.根据权利要求1所述的昆虫浅色触角内淋巴管可视化的方法，其特征在于：步骤1)中，所述的气体为体积95％氧气和5％二氧化碳构成的混合气体。

4.根据权利要求1所述的昆虫浅色触角内淋巴管可视化的方法，其特征在于：将步骤2)中浓度5％的甲醛溶液和浓度10％的甲醛溶液均替换为浓度4％的多聚甲醛溶液。

5.根据权利要求1所述的昆虫浅色触角内淋巴管可视化的方法，其特征在于：所述的步骤5)拍照时间控制在3-5分钟内完成。