[发明专利]一种同时检测多种转基因油菜品系的快速检测试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及一种专门用于转基因油菜品系鉴定的PCR微流控芯片。本发明设计筛选得到一系列适用于微流控芯片的特异性高、准确度高的常见转基因油菜元件的PCR扩增引物，并通过冻干将所述引物结合至PCR微流控芯片，实现在一次PCR扩增反应中对内源基因和多种外源基因的高通量筛查检测。本申请提供的预冻存引物的PCR微流控芯片在常温及反复冻融情况下均具有良好的稳定性，具有良好的商业应用价值。

技术领域

本发明涉及农业转基因检测技术领域，具体涉及一种包含能同时筛查10种转基因油菜品系的引物组的微流控荧光PCR芯片试剂盒及其应用。

背景技术

转基因作物于1996年开始大规模商业化种植，2017年全球种植面积达到1.898亿公顷。自转基因作物首次商业化以来，转基因作物一直伴随着不同的声音。一方面，转基因作物确实大大增加了农作物的产量，减少了农药的使用，保护了环境；但另一方面，转基因作物对环境、社会和经济所产生的潜在不确定性遭到了多方面的质疑。因此，加强转基因安全监管，建立转基因产品标识制度已成为国际通行做法，美国、欧盟、日本、韩国等国家和地区实行定量标识，而我国实行“零阈值”的定性标识，即只要纳入标识目录的转基因产品，无论含量多少都需要标识。

随着转基因植物研究的迅速发展，生物技术成为全球应用最为迅速的作物技术。转基因作物在五大转基因作物种植国家的平均应用率(大豆、玉米和油菜的平均应用率)不断增长，已经接近饱和，其中美国93.3％、巴西93％、阿根廷接近100％、加拿大92.5％、印度95％。油菜是人们食用油的主要来源之一，栽培历史十分悠久。中国和印度是世界上栽培油菜最古老的国家。一般油菜籽的含油量约为40％左右。通过转基因技术培育出来的油菜籽，可以大大地提高它的出油率，而且油的纯度质量更好。然而，人们对转基因作物的安全性存在着很多的争论。面对生物基因工程技术对我国经济利益带来的冲击和国外转基因产品对生态环境和消费者可能带来的风险，对转基因油菜进行检测具有重要的现实意义。

目前，转基因作物的检测方法主要包括基于蛋白的检测方法和基于核酸的检测方法两类；前者主要包括免疫试纸条法、酶联免疫吸附法、蛋白印迹法等。而后者中，应用最为广泛的为定性和定量PCR检测技术。对转基因成分的PCR检测方法主要为TaqMan实时荧光PCR方法和普通PCR方法。普通PCR方法由于操作繁琐、污染环境、灵敏度低等不足已逐渐被实时荧光PCR检测方法所取代。但是单通道TaqMan实时荧光PCR法检测成本较高，步骤繁琐，不适于转基因产品的多品系筛查检测。尤其对于业务量大的检测部门，需要研发一种简单快捷、灵敏准确同时又省时省力的高效检测方法。

为解决上述问题，本发明将PCR微流控芯片检测技术应用于转基因油菜产品高通量筛查检测。在一次PCR扩增过程中，同时完成1个内源基因(CruA基因)以及MO88302、73496、Ms1、Rf2、Rf1、Topas19/2、GT73、Ms8、Rf3、T45等10个商业化转基因品系的外源基因筛查检测。与单重检测方法相比，在一次PCR扩增反应中同时检测内源基因和多种外源基因，可有效减少因为实验操作失误引起的误差；可实现多样品、多基因靶点的高通量筛查检测。

发明内容

PCR微流控芯片是利用MEMS(Micro-Electro-Mechanical System)技术和微流控技术制备的微流控芯片，是一种先进的体外核酸扩增技术。微流控芯片具有体积小、比表面积大、集成度高、反应速度快、传热快等特性。通过在硅、玻璃、塑料、高聚物等基片材料上加工出一系列的微通道、微反应室及各种微控制器，从而使PCR在芯片上能够快速扩增。与常规的PCR扩增技术相比，PCR微芯片具备高效、快速、消耗试剂少、易于携带、集成度高等优点，是近年来研究的热点之一，在分子生物学、疾病检测、生物技术、免疫学、基因组工程、临床医学及环境检测等各个领域都有很广泛的应用。

本发明的目的是提供一种能够同时完成多种转基因外源基因筛查的微流控芯片及其应用技术，以实现在一次PCR扩增反应中同时检测内源基因和多种外源基因，实现多基因靶点的高通量筛查检测。