[发明专利]SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段及其应用

说明书

本发明从新冠病毒感染后康复人员PBMC中分离冠状病毒纤突蛋白RBD特异性记忆B细胞、扩增获得抗体轻重链可变区序列，连接导入载体、重组表达获得重组人源单抗，从中选择出与SARS‑CoV‑2纤突蛋白RBD亲和力高、对SARS‑CoV‑2纤突蛋白RBD与宿主受体ACEII阻断力强、对病毒侵染细胞的中和活力强的单抗，进而对所述单抗的ADE效应的进行筛选，最终获得一株不产生ADE现象的抗SARS‑CoV‑2S蛋白特异性抗体MW07。

技术领域

本发明属于抗体工程领域，具体涉及一种针对冠状病毒的单抗及其应用， 特别是涉及一种SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段、制备方法及应用。

背景技术

尽管康复患者血浆疗法在临床上取得了一定的成效，然而由于抗原患者血 浆来源有限、纯化抗体安全隐患高、特异性抗体效价不稳定。效价高、性能稳 定、安全性好的单克隆抗体对于控制新冠状病毒疫情具有良好的应用前景。目 前现有文献已经公开或教导了针对新冠病毒RBD制备保护性中和单抗的报道。 利用新冠病毒刺突蛋白RBD产生抗新冠病毒的保护性中和抗体(如：bioRxiv， “SARS-CoV-2 and SARS-CoV Spike-RBD Structureand Receptor Binding Comparison and Potential Implications on NeutralizingAntibody and Vaccine Development”，20200220)。SARS刺突蛋白RBD和新冠病毒刺突蛋白RBD存 在交叉中和表位肽，抗SARS的单克隆抗体CR3022能够结合新冠病毒刺突蛋 白RBD(Emerging MicrobesInfections，9(1)：382-385，20200217)。采用同源建 模的方法明确了新冠病毒病毒CTD1/人ACE2复合物的蛋白-蛋白相互作用界面 的热点和关键残基，筛选靶向CTD1区域与ACE2结合表面的候选抑制剂，阻 断病毒与人体ACE2蛋白的识别与结合。

随着抗SARS-CoV-2疫苗和治疗性抗体研究的持续推进，最近有报道表明 部分治疗性抗体用于SARS-CoV-2治疗时可产生ADE现象。所谓的ADE，是 指抗体依赖的增强作用，某些病毒在特异性抗体协助下复制或感染能力显著增 强，在感染过程中会引发更严重病理损伤。通俗的解释就是，抗体不能中和病 毒，反而充当了“特洛伊木马”，让病毒感染免疫细胞的能力更强，产生更多的 子代病毒，造成严重症状。

迄今为止，阻断新冠病毒结合宿主ACE2的单克隆抗体仍停留在理论研究 阶段，尚没有序列结构清楚、阻断新冠病毒结合功能明确的单克隆抗体的现有 技术报道。另外，现有技术中关于抗SARS-CoV-2 S蛋白抗体的研究发现在 SARS-CoV-2感染宿主细胞过程中存在着抗体依赖的增强效应(ADE)，为SARS-CoV-2疫苗和治疗性抗体的研究带来困难。

发明内容

为解决上述问题，本发明从新冠病毒感染后康复人员PBMC中分离冠状病 毒纤突蛋白RBD特异性记忆B细胞、扩增获得抗体轻重链可变区序列，连接导 入载体、重组表达获得重组人源单抗，从中选择出与SARS-CoV-2纤突蛋白RBD 亲和力高、对SARS-CoV-2纤突蛋白RBD与宿主受体ACEII阻断力强、对病毒 侵染细胞的中和活力强的单抗，进而对所述单抗的ADE效应的进行筛选，最终 获得一株不产生ADE现象的抗SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体MW07。具体而 言：

第一方面，本发明提供一种SARS-CoV-2 S蛋白特异性抗体或其片段，其特 征在于所述抗体或其片段的特异性结合的抗原表位是存在于SARS-CoV-2 S1蛋 白上的抗原表位，并且不存在于SARS-CoV S1蛋白、MERS-CoV S1蛋白上。