[发明专利]一种利用荧光标记痘病毒颗粒的方法及其应用

说明书

本发明提供一种利用荧光标记痘病毒颗粒的方法及其应用，该方法利用CFSE荧光染料染色痘病毒颗粒，得到CFSE标记的痘病毒颗粒，另外本发明提供荧光标记痘病毒颗粒的应用，用于获取痘病毒颗粒感染靶细胞的情况，此时，CFSE标记的痘病毒颗粒可以在体外或体内感染靶细胞，通过流式细胞仪检测CFSE荧光颗粒的数量或者荧光显微镜下观察CFSE荧光颗粒的数量和分布情况，即可快速检测痘病毒颗粒感染靶细胞的情况，整个步骤不需要购置特殊的病毒或种属特异性抗体，具有检测快速高效，成本低的特点和优势。

技术领域

本发明涉及病毒检测领域，特别涉及一种利用荧光标记测痘病毒颗粒的方法及其应用。

背景技术

痘病毒，是能够使得人和动物被感染后引起局部或者全身化脓性皮肤损害的病毒。痘病毒，属于痘病毒科，其种类繁多，包括天花病毒、猴痘病毒、牛痘病毒、鼠痘病毒、鸡痘病毒等，不仅如此，痘病毒也是病毒颗粒最大的一类DNA病毒，其有着复杂庞大、高达200Kb的双链DNA基因组，病毒颗粒直径超过0.2μm。

实时、可视化的病毒侵染宿主细胞的过程有助于从本质上诠释病毒的侵染机制及致病机理,为了成功地跟踪病毒，需要一种有效的标记方法。病毒标记技术可分为荧光蛋白标记和化学标记：荧光蛋白标记主要是指重组荧光蛋白标记；化学标记技术主要包括量子点技术，双砷结合技术，点击化学以及化学荧光染料标记技术。尽管基因工程和化学偶联已被应用于追踪宿主细胞和体内的病毒感染，但这些策略可能会干扰病毒的侵入途径，而且技术要求高、过程繁琐、效率不高。

荧光染料(CFSE)，是一种可对活细胞进行荧光标记的小分子新型染料，可以标记活体细胞。其基本原理如下：CFSE能够轻易穿透细胞膜，在活细胞内与胞内蛋白共价结合，水解后释放出绿色荧光。CFSE主要用于细胞增殖，体内细胞追踪，细胞毒性检测等，此方法操作简单，且不用放射性同位素，不存在安全隐患，且可以更快速，更准确和更安全的得到想要的实验数据。

然而CFSE通常应用于真核细胞标记，也偶见于原核细胞如细菌，在病毒中未见有报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用荧光标记痘病毒颗粒的方法及其应用，该方法利用CFSE荧光染料染色痘病毒颗粒，得到CFSE标记的痘病毒颗粒，另外本发明提供荧光标记痘病毒颗粒的应用，用于检测痘病毒颗粒感染靶细胞的情况，此时，CFSE标记的痘病毒颗粒可以在体外或体内感染靶细胞，通过流式细胞仪检测CFSE荧光颗粒的数量或者荧光显微镜下观察CFSE荧光颗粒的数量和分布情况，即可快速检测痘病毒颗粒感染靶细胞的情况，整个步骤不需要购置特殊的病毒或种属特异性抗体，具有检测快速高效，成本低的特点和优势。

为实现以上目的，本方案提供一种利用荧光标记痘病毒颗粒的方法,包括以下步骤:取纯化的痘病毒颗粒，加入CFSE荧光染料进行染色，得到CFSE标记的痘病毒颗粒。

在本方案中，将加入CFSE荧光染料的痘病毒颗粒置于37摄氏度室温条件下孵育15-45分钟，在孵育结束后，加入2倍体积的含有10％FBS的完全培养基终止染色。

另外，可通过流式细胞仪检测CFSE荧光颗粒的数量或在荧光显微镜下观察CFSE荧光颗粒。其中荧光显微镜选择为倒置荧光显微镜，本申请人通过多次验证实验证明CFSE荧光染料的确可以染色痘病毒颗粒。

另，本方案提供一种利用荧光标记痘病毒颗粒的应用，用于获取痘病毒颗粒感染靶细胞的情况。

此时，该方案的具体步骤如下：

步骤S1:取纯化的痘病毒颗粒，加入荧光染色试剂CFSE荧光染料进行染色，得到CFSE标记的痘病毒颗粒；

步骤S2：将CFSE标记的痘病毒颗粒按照设定浓度比例加入待检测样本中，其中待检测样本内含有靶细胞；