[发明专利]一种山田平脐蠕孢菌菌株、其筛选和鉴定方法及其用途

权利要求书

1.一种山田平脐蠕孢菌菌株，其特征在于，所述菌株为山田平脐蠕孢菌菌株HXDC-1-2，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.17778。

2.根据权利要求1所述的一种山田平脐蠕孢菌菌株，其特征在于，所述菌株的菌落直径为50～60mm，灰黑色，菌落背面黑褐色，无水溶性色素；其分生孢子梗呈橄榄绿或黄褐色，单生或少数丛生，顶端色浅，屈膝状弯曲，宽4.5～9.5μm；其分生孢子呈黄褐色至深褐色，拟纺锤形或倒棍棒形，直或微弯，中部略宽，两端略窄，基细胞钝圆，光滑，6～9个假隔膜，54.5～92.5×12.5～17.5μm。

3.权利要求1所述的一种山田平脐蠕孢菌菌株的筛选和鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1)将该菌株于28℃黑暗培养箱培养四天，采用真菌gDNA提取试剂盒提取DNA，分别利用rDNA ITS序列、GPDH序列和EF1α序列进行PCR扩增，其通用引物分别为ITS4、ITS5、GPD1、GPD2、EF1-983F、EF1-2218R；

ITS4：5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’

ITS5：5’-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3’

GPD1：5’-CAACGGCTTCGGTCGCATTG-3’

GPD2：5’-GCCAAGCAGTTGGTTGTGC-3’

EF1-983F：5’-GCYCCYGGHCAYCGTGAYTTYAT-3’

EF1-2218R：5’-ATGACACCRACRGCRACRGTYTG-3’

步骤2)将步骤1)得到的扩增产物经琼脂糖凝胶电泳回收，连接至pMD19载体，转化大肠杆菌DH5α，经过蓝白斑筛选，挑取白色菌落，摇菌，得到菌液；步骤3)对步骤2)制得的菌液进行测序，所测结果在Genbank中核酸数据库的ITS、GPDH和EF1α相关序列进行同源性比较；

步骤4)经扩增测序比对后，EF1α扩增序列MK026429、KY905693分别与Bipolarisyamadae模式菌株ACCC36334、CBS127087同源性均为99％以上，ITS扩增序列MF490813与Bipolaris yamadae模式菌株CPC28807的同源性为99％以上，GPDH扩增序列MF490835与Bipolaris yamadae模式菌株CPC28807同源性为99％，可确定菌株为山田平脐蠕孢菌。

4.根据权利要求3所述的一种山田平脐蠕孢菌菌株的筛选和鉴定方法，其特征在于，所述ITS扩增序列MF490813如SEQ ID NO：1所示，所述GPDH扩增序列MF490835如SEQ ID NO：2所示，所述EF1α扩增序列MK026429、KY905693如SEQ ID NO：3所示。

5.权利要求1所述的山田平脐蠕孢菌菌株用作生物除草剂的用途。

6.根据权利要求5所述的山田平脐蠕孢菌菌株用作生物除草剂的用途，其特征在于，利用所述山田平脐蠕孢菌菌株的分生孢子的浓度为每毫升10²个以上，接种于作物田的目标杂草上。

7.根据权利要求6所述的山田平脐蠕孢菌菌株用作生物除草剂的用途，其特征在于，所述杂草包括禾本科杂草、莎草科杂草、阔叶杂草，其中，所述禾本科杂草包括稗草、狗尾草、马唐、牛筋草、千金子、虮子草、野燕麦、看麦娘、假高粱、柔枝莠竹及其近缘属植物；所述莎草科杂草包括碎米莎草、旋鳞莎草、扁穗莎草；所述阔叶杂草包括葎草、合萌、藜、小藜。

8.根据权利要求7所述的山田平脐蠕孢菌菌株用作生物除草剂的用途，其特征在于，所述柔枝莠竹近缘属植物包括莠竹、刚莠竹、日本莠竹、荩草。

9.根据权利要求6所述的山田平脐蠕孢菌菌株用作生物除草剂的用途，其特征在于，所述作物包括水稻、玉米、大豆、花生、芝麻、粟、蚕豆、豌豆、油菜、蔬菜、花卉、中药材、果树。

10.根据权利要求9所述的山田平脐蠕孢菌菌株用作生物除草剂的用途，其特征在于，所述蔬菜包括青菜、白菜、萝卜、丝瓜、茄、辣椒；所述中药材包括紫苏、荆芥、活血丹；所述果树包括杨梅。