[发明专利]一种检测禽腺病毒I群的间接免疫荧光试剂盒

说明书

本发明涉及一种检测禽腺病毒I群的间接免疫荧光试剂盒。该试剂盒包括抗禽腺病毒I群单克隆抗体，FITC标记羊抗鼠抗体，样品稀释液和洗涤液。本发明中所述抗禽腺病毒I群的单克隆抗体，是基于Penton蛋白作为禽腺病毒重要的免疫原性蛋白，在禽腺病毒I群不同血清型毒株之间相对保守所制备的单克隆抗体，可同时识别禽腺病毒I群12个血清型病毒，而不与鸡减蛋综合征病毒(EDSV)等病毒发生交叉反应。本发明试剂盒具有良好的特异性。该试剂盒不仅可用于禽病毒类活疫苗中禽腺病毒I群的外源病毒检测，还可用于禽腺病毒I群的临床检测和流行病学调查。

技术领域

本发明涉及一种检测禽腺病毒I群的间接免疫荧光试剂盒，属于兽用生物技术检测领域。

背景技术

禽腺病毒(Avian adenoviruses，FAdV)是一种无囊膜的线状双股DNA病毒，根据其抗原结构不同可分为3个群，I群(FAdV-I)主要是传统的FAdV，其中从鸡分离到的有12个血清型(FAdV1-8a，8b-FAdV11)，5个基因型(FAdV ABCDE)。鸡感染FAdV-I后可引起产蛋量下降、饲料转化率低、呼吸道疾病等症状，严重时可能导致死亡，为养殖业造成巨大的经济损失。特别是2015年7月以来，“鸡肝炎-心包积液综合征”在华中和华北地区鸡群中广泛发生。疫情最初出现在饲养管理水平低、卫生条件差的小型养殖场，之后波及大型集约化养殖企业。疫情传播迅速，发病鸡群死亡率高。1月龄内的小鸡死亡率高达80％，青年鸡和成年鸡死亡率1％～20％。当前疫病主要分布于黑龙江、吉林、辽宁及山西等地，根据鉴定确诊为FAdV感染，且FAdV-I血清型4型为主要流行毒株。

疫苗中污染FAdV-I是引起FAdV-I传播和流行的潜在风险。在禽源活疫苗成品检验环节，我国《中华人民共和国兽药典》(三部)二〇一五年版、美国及欧洲药典中，对禽用活疫苗成品外源病毒检验时均无专门针对FAdV-I检验的方法，但《欧洲药典》对基础种毒的外源病毒检验需用鸡检查法，该方法需对I群FAdV进行检测。我国对基础种毒外源病毒的检验未强制使用鸡检查法，且目前的鸡检查法中也没有对FAdV-I进行检测的要求。一旦疫苗中污染了FAdV-I，使用后会引起鸡群大面积感染，造成严重损失，这对该病的疫控带来了潜在的风险，因此亟需建立稳定有效的检测FAdV-I的方法用于禽活疫苗的质量检测。

I群禽腺病毒FAdV-I分为12个血清型(FAdV1-8a，8b-FAdV11)和5个基因型(FAdVABCDE)。除了血清4型外，FAdV-8a、FAdV-8b、FAdV-10及FAdV-11等血清型在我国鸡群中均有流行和感染。该特征为I群FAdV的鉴定和检测带来很大的挑战。然而，目前国内关于FAdVI-I检测方法和试剂盒主要针对血清4型等个别流行毒株，尚无可以同时检测FAdV-I 12个血清型病毒的诊断方法及试剂盒。

本专利建立的FAdV-I检测方法可同时检测FAdV-I 12个血清型病毒，而不对其他病毒产生交叉反应，便捷高效，可操作性强，具有较高的特异性和灵敏度。推广和使用该方法有利于进一步保证我国禽用病毒类活疫苗的纯净性和安全性，进而提高疫苗质量，还可用于禽腺病毒I群的临床检测和流行病学调查。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测禽腺病毒I群12个血清型病毒的间接免疫荧光试剂盒。本发明的原理和最核心的关键技术是针对FAdV-I的12个血清型毒株Penton蛋白保守序列进行二级结构、亲疏水性、抗原性等分析，选取抗原重组表位，构建至原核表达载体，并进行表达纯化，制备免疫原进行单克隆抗体制备，通过抗原抗体特异性反应，同时一抗被带有荧光标记的抗鼠IgG识别，以达到对FAdV-I进行特异性鉴定的目的。

本发明的技术方案

1.一种检测禽腺病毒I群的间接免疫荧光试剂盒，其特征在于该试剂盒包括抗禽腺病毒I群的单克隆抗体，FITC标记的羊抗鼠抗体，样品稀释液和洗涤液；