[发明专利]一种检测儿童安全用药相关基因突变位点的引物组合序列和试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测儿童安全用药相关基因突变位点的引物组合序列和试剂盒。试剂盒包括23对扩增引物，能特异地扩增儿童安全用药相关基因23个常见突变位点区域；23条单碱基延伸引物，用于检测儿童安全用药相关基因23个突变位点基因型；另外包括预处理及检测专用试剂。本发明所述试剂盒可实现1孔检测临床儿童安全用药相关基因23种突变，灵敏度高、特异性强、准确性高，并且操作简便、低成本、高通量，检测快速，结果自动判读，易于临床推广应用。本发明可应用于新生儿或儿童安全用药相关基因的检测，指导临床正确用药，避免用药风险，减少用药伤害，真正地做到精准用药。

技术领域

本发明涉及分子生物检测技术领域，更具体地，涉及以多重PCR技术结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)技术通过质谱技术与多引物延伸技术和MassARRAY技术结合使用进行儿童安全用药基因检测的引物序列及试剂盒。

技术背景

目前，儿童药物中毒已成为全球公共卫生问题，全球每天有125名儿童因中毒而死亡。在中国，中毒也是儿童伤害死亡的主要原因之一。据国家食药监总局《2016儿童用药安全调查报告白皮书》中数据显示，在儿童群体中，药物中毒占所有中毒就诊儿童的比例从2012年的53％上升到2014年的73％。我国儿童不合理用药高达12％-32％，儿童用药不良反应率为12.9％，其中新生儿高达24.4％。因用药不当，我国每年约7000例儿童死亡，造成肝肾功能、神经系统等损伤的儿童难以计数。据中国聋儿康复研究中心统计，我国7岁以下儿童因不合理使用抗生素造成耳聋的数量多达30万，占总体聋哑儿童比例的30％-40％，50％以上的婴幼儿都在超标用药，每年有30000名儿童，因用药不当致聋，陷入无声世界。可怕的是因用药不当对机体造成的损伤，绝大部分是永久性的。而药物不良反应已经成为人类除了癌症、脑溢血和心血管疾病外的第四大死因。

世界卫生组织发表声明，每年全球约有上千万儿童死亡，其中2/3的儿童死于用药不当，其中新生儿的死亡率占5岁以下儿童死亡率的44％。如何保障大众儿童合理正确使用药物已成为一个亟待解决的重点问题。

我国现有3500多种药品制剂，儿童专用的仅有60多种，所占比例不足2％，大部分药品说明书及相关文献，都缺乏对儿童用药安全性及有效性的资料，90％以上的药品没有适宜儿童的专用剂型；成人药普遍用于儿童，但儿童不是成人的缩小版。很多药品缺少儿童临床试验数据，儿童给药剂量多依据成人剂量，再通过体重换算、体表面积换算、年龄换算等方法来确定，缺乏精准用药的手段。儿童的基因特性决定了机体对药物的代谢能力强弱，直接影响到用药效果。药物在体内代谢慢，将造成药物在体内积聚，严重的便会引起药物中毒。由于每个人体质不同、基因型不同，就算服用相同的药物和剂量，其所产生的效果和副作用也会有所不同。特别是儿童，由于身体各项机能发育尚不完全，对药物的代谢能力本来就很有限，如果弄不清楚孩子体内药物代谢相关基因突变情况的前提下擅自用药，那么带来的伤害将会是难以挽回的。因此，为了避免因治疗时用药不当对儿童造成的危害，需要对儿童的药物基因类型进行检测，选择准确的药物，以适当的方法、剂量、时间指导准确用药。

儿童药物不良反应发生率高，跟多种因素有关。儿童药缺乏、抄说明书使用是首要原因。而另一方面，不良反应的发生跟个体基因也密切相关。研究发现，大部分的药物，是通过肝脏中的细胞色素P450家族酶类(CYP450)实现代谢。而这种酶存在广泛的基因多态性和表型多态性，使其对各种药物的代谢存在个体差异。药物在个体体内的代谢是儿童用药安全性的重要参考因素，例如药物快代谢型的儿童统一正常剂量，服用药物可能会无法获得良好的疗效，而药物慢代谢型的儿童在正常剂量下则可能会引起药物蓄积，损害健康。检测与药物代谢紧密相关的酶的基因型，了解孩子对于三大类常用药物的代谢类型，可避免孩子因用药不当而产生严重不良反应。在美国，规定了新生儿必须进行安全用药的基因检测，以防止因基因问题而导致药物副作用对儿童健康造成伤害。