[发明专利]一种含有多种生长因子的胎盘提取液的高效制备方法

权利要求书

1.一种含有多种生长因子的胎盘提取液的高效制备方法，其特征在于，采用两步提取法，具体包括以下步骤：

步骤1：在无菌操作台内用生理盐水清洗胎盘并去除胎盘膜组织；

步骤2：将胎盘剪碎，加生理盐水，反复离心至上清颜色为无色或者淡黄色，弃上清，得胎盘组织；

步骤3：将离心所得胎盘组织匀浆、过滤，得滤液A；

步骤4：将滤液A进行-80℃和室温冻融，反复冻融多次，然后将滤液A离心，留上清并过滤，得滤液B；

步骤5：向匀浆后未能通过滤网的组织中添加胰酶，37℃恒温摇床酶解30-150min，终止酶解，得酶解液A；

步骤6：将酶解液A离心，沉淀加生理盐水后再离心，得沉淀A，向沉淀A中添加由胶原酶II、DNase和透明质酸酶组成的混合酶溶液，37℃酶解40-200min，终止酶解，得酶解液B；

步骤7：将酶解液B过滤，滤液离心，得沉淀B；

步骤8：向沉淀B中加入红细胞裂解液，裂解3-10min，离心，得沉淀C；

步骤9：向沉淀C中添加注射用水，-80℃和常温反复冻融3-4次，离心，得上清A；

步骤10：将滤液B和上清A混合，过滤，将滤液浓缩，即得人胎盘提取物。

2.根据权利要求1所述的含有多种生长因子的胎盘提取液的高效制备方法，其特征在于，在步骤3中，向离心所得胎盘组织按照重量比1:5加入生理盐水，使用组织匀浆机进行组织匀浆，然后过400目滤网。

3.根据权利要求1所述的含有多种生长因子的胎盘提取液的高效制备方法，其特征在于，在步骤5中，所用胰酶溶液的质量浓度为0.1％-0.5％，并且每1L胰酶溶液中含有0.2gEDTA，组织与胰酶溶液的重量比为0.5-10:1。

4.根据权利要求1所述的含有多种生长因子的胎盘提取液的高效制备方法，其特征在于，在步骤6中，在所述混合酶溶液中，胶原酶II的质量浓度为0.05％-0.4％，DNase和透明质酸酶的浓度分别为20-100IU/ml、400-1000IU/ml。

5.根据权利要求4所述的含有多种生长因子的胎盘提取液的高效制备方法，其特征在于，沉淀A与混合酶溶液的重量比为0.5-10:1。

6.根据权利要求1所述的含有多种生长因子的胎盘提取液的高效制备方法，其特征在于，在步骤7中，酶解液B过滤前按照体积比1:3-10先加入生理盐水，然后用100um滤网过滤。

7.根据权利要求1所述的含有多种生长因子的胎盘提取液的高效制备方法，其特征在于，在步骤8中，沉淀B与红细胞裂解液的体积比为1:3-10。

8.根据权利要求1所述的含有多种生长因子的胎盘提取液的高效制备方法，其特征在于，在步骤10中，用0.45um滤网过滤。