[发明专利]一种灵敏检新型冠状病毒抗体的增敏型免疫层析试剂盒

权利要求书

1.一种灵敏检测新型冠状病毒抗体的增敏型免疫层析试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括胶体金免疫层析试纸条和铜生长液，胶体金免疫层析试纸条由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水纸依次固定于PVC塑料底板上，所述结合垫为喷涂有胶体金标记的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原和胶体金标记的兔IgG抗体的玻璃纤维膜，所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，检测线上包被有SARS-CoV-2重组抗原，质控线上包被有抗兔二抗溶液；所述铜生长液包括铜生长A液和铜生长B液，铜生长A液为聚合物和二价铜离子预先形成铜离子配位生长液，铜生长B液为抗坏血酸钠和柠檬酸三钠混合溶液。

2.一种灵敏检新型冠状病毒抗体的增敏型免疫层析试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)胶体金标记的重组抗原的制备：取1mL粒径为30～40nm柠檬酸包被胶体金溶液，用浓度0.2M的碳酸钾溶液调节该溶液的pH值至7.0～8.0；向溶液加入5μL浓度为1～2mg/mLSARS-CoV-2重组抗原溶液，室温下振荡反应30min；然后再将100μL1～2mg/mL牛血清白蛋白溶液加至上述混合溶液中继续于室温下振荡反应30min；在4℃条件下，于10000rpm离心20min，弃上清，沉淀物复溶于0.01M pH7.4磷酸盐缓冲溶液(PBS)，得终产物胶体金标记的重组抗原；胶体金标记兔IgG抗体采用相同的方法完成，将SARS-CoV-2重组抗原溶液替换成兔IgG抗体溶液。

2)胶体金免疫层析试纸条的制备：a)结合垫的制备是将胶体金标记的重组抗原和胶体金标记的兔IgG抗体喷涂于玻璃纤维膜上；b)具有检测线和质控线的硝酸纤维膜的制备是将浓度为1～2mg/mL SARS-CoV-2重组抗原和浓度为1～2mg/mL抗兔二抗溶液分别喷涂硝酸纤维膜上绘制两条线平行线，SARS-CoV-2重组抗原溶液划线作为检测线(T线)，抗兔二抗溶液划线为质控线(C线)；c)胶体金免疫层析试纸条组装：将样品垫、具有金标检测抗体的结合垫、具有T和C线的硝酸纤维膜和吸水纸分别依次粘贴到塑料衬板上，相邻重叠部分的长度为2mm，切割成4mm宽的试纸条，密封干燥，于温度保存；

3)铜生长液的配置：a)铜生长A液：准确称取200～400mg氯化铜和100～200mg聚合物分别溶解于10mL超纯水中，然后将二者混均制备得铜生长A液；b)铜生长B液：准确称取1～2g抗坏血酸钠和1mg柠檬酸三钠分别溶解于10mL和1mL超纯水中，然后将二者混均制备得铜生长B液。

3.根据权利要求2所述的一种灵敏检新型冠状病毒抗体的增敏型免疫层析试剂盒，所述聚合物为聚乙烯亚胺PEI、聚丙烯酸PAA、聚乙烯吡咯烷酮PVP或聚赖氨酸PL。

4.一种灵敏检新型冠状病毒抗体的增敏型免疫层析试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)取100～120μL待测样品溶液加入到试纸条的检测卡加样孔中，于室温反应5～10min；

2)将上述反应后的试纸条依次使用磷酸盐缓冲液和超纯水洗涤后，浸泡于铜生长A液中室温反应5min；

3)接着将试纸条转移至铜生长B液中继续反应2min，使聚合物介导铜纳米壳层可控生长沉积至胶体金表面，显著增强胶体金的光学信号强度，肉眼观察实验结果。