[发明专利]一种丝蛋白/壳聚糖/生物玻璃三维复合支架制备方法

权利要求书

1.一种丝蛋白/壳聚糖/生物玻璃三维复合支架制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1，硫酸素蛋白制备；

步骤1.1，用0.05％的Na₂CO₃煮沸生丝5次，每次1h；

步骤1.2，用蒸馏水洗净步骤1.1处理后的生丝，在50℃下烘干，得到纯丝素纤维；

步骤1.3，将CaCl₂、CH₃CH₂OH、H₂O三元溶剂溶解，在自来水下透析后加入步骤1.2的纯丝素纤维，于40℃-60℃下搅拌溶解1-2h得到混合溶液；

步骤1.4，混合溶液冷却后注入纤维素透析膜，在流水下透析3d；

步骤1.5，将步骤1.4透析后的溶液浓缩，得到丝素蛋白浓缩水溶液，4℃下保存备用。

步骤2，硫酸化丝素制备；

步骤2.1，在通风橱内将10g吡啶三氧化硫溶于50mL吡啶中，混匀后将其转移至回流装置中；

步骤2.2，水浴锅加热至沸腾后，将1g步骤1制备的丝素蛋白浓缩水溶液放入回流装置中反应；

步骤2.3，反应6h后取出，并加50mL蒸馏水冷却以终止反应，用2.5mol/L NaOH溶液进行中和后，加入到透析袋中用蒸馏水进行透析；

步骤2.4，透析3d后进行冷冻干燥得到硫酸化丝素。

步骤3，不溶于水的硫酸丝素蛋白/羧甲基壳聚糖多孔材料制备；

步骤3.1，将双纯水溶解羧甲基壳聚糖和步骤2制备的硫酸丝素蛋白搅拌均匀，真空脱泡，得到羧甲基壳聚糖/硫酸丝素蛋白混合溶液；

步骤3.2，将混合溶液注入模具，-20℃预冷过夜，在冷冻干燥机-80℃～-60℃温度下真空冷冻干燥24小时，获得羧甲基壳聚糖/硫酸丝素蛋白多孔复合材料；

步骤3.3，将步骤3.2制备的多孔复合材料浸泡于含水甲醇溶液中30min，然后烘箱烘干4h，得到不溶于水的硫酸丝素蛋白/羧甲基壳聚糖多孔材料。

步骤4，生物活性玻璃制备；

步骤4.1，每30min依次将正硅酸乙酯(TEOS)、磷酸三乙酯(TEP)和四水硝酸钙(CN)加入2mol/L盐酸溶液与一定体积去离子水混合液中搅拌均匀，得到BG溶胶液；

步骤4.2，步骤4.1的BG溶胶液在室温下静止陈化，充分水解-缩聚，形成BG湿凝胶；

步骤4.3，恒温干燥箱内将步骤4.2的BG湿凝胶在120℃条件下，干燥3d，得到BG干凝胶；

步骤4.4，将步骤4.3的BG干凝胶用箱式电炉在650℃条件下热处理获得颗粒状溶胶-凝胶生物活性玻璃；

步骤4.5，干燥后，在震动筛上分级处理，得到BG颗粒备用。

步骤5，硫酸丝素蛋白/羧甲基壳聚糖/生物活性玻璃三维复合支架制备；

步骤5.1，将步骤4制备的BG颗粒与步骤3制备的硫酸丝素蛋白/羧甲基壳聚糖多孔材料溶液以质量体积比M/V＝1：10的比例进行混合，搅拌真空脱气；

步骤5.2，将步骤5.1处理的溶液注入模具中，-20℃预冷过夜，在冷冻干燥机-80℃～-60℃温度下真空冷冻干燥24h，获得硫酸丝素蛋白/羧甲基壳聚糖/生物活性玻璃三维复合支架；

步骤5.3，将步骤5.2的三维复合支架浸泡于含水甲醇溶液中30min，然后37℃烘箱烘干，得到不溶于水的硫酸丝素蛋白/羧甲基壳聚糖/生物活性玻璃三维复合支架。

2.根据权利要求1所述的一种丝蛋白/壳聚糖/生物玻璃三维复合支架制备方法，其特征在于，步骤1.1中的煮沸温度为100℃、浴比为1:100。

3.根据权利要求1所述的一种丝蛋白/壳聚糖/生物玻璃三维复合支架制备方法，其特征在于，所述步骤1.3中的CaCl₂、CH₃CH₂OH、H₂O三元溶剂的摩尔比为1:2:8。

4.根据权利要求1所述的一种丝蛋白/壳聚糖/生物玻璃三维复合支架制备方法，其特征在于，所述步骤1.3中的三元溶剂和纯丝素纤维的质量比为10:1。