[发明专利]LRG1作为诊断血栓闭塞性脉管炎的血清学标志物的应用

权利要求书

1.LRG1作为诊断血栓闭塞性脉管炎的血清学标志物的应用。

2.LRG1作为诊断血栓闭塞性脉管炎炎症活动程度的血清学标志物的应用。

3.一种用于诊断血栓闭塞性脉管炎的试剂盒，该试剂盒包括：

酶标板、LRG1标准品、样品稀释液、酶标试剂、显色剂A、显色剂B、终止液。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于

其中样品稀释液为：PBS；

酶标试剂为:LRG1抗体；

显色剂A为：醋酸钠13.6g,柠檬酸1.6g,30％双氧水0.3ml,蒸馏水加至500ml；

显色剂B为：乙二胺四乙酸二钠0.2g,柠檬酸0.95g,甘油50ml,0.15gTMB,蒸馏水加至500ml；

终止液为：2nmol/L H₂SO₄溶液。

5.根据权利要求3或4任一项所述的试剂盒，其特征在于还包括说明书。

6.一种应用权利要求3所述的试剂盒诊断血栓闭塞性脉管炎的方法，该方法包括如下步骤：

(1)加样：酶标板的孔内分别加入待测样品或标准品各50μL，同时设立空白对照；

(2)加酶：每孔加入酶标试剂100μL，空白对照除外；

(3)温育：用封板膜封板后置入37℃温育60分钟；

(4)洗涤：揭掉封板摸，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干；

(5)显色：每孔先加入显色剂A50μL,再加入显色剂B50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟；

(6)终止：每孔加终止液50μL，终止反应；

(7)测定：以空白孔凋零，450nm波长依序测量各孔的吸光度；

(8)计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。