[发明专利]一种系统性红斑狼疮的动物模型的构建方法

权利要求书

1.一种新型系统性红斑狼疮的动物模型的构建方法，其包括如下步骤：

1）利用Crispr/Cas9技术，在小鼠谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）基因2号外显子上游及4号外显子下游插入loxP位点，构建亲代鼠1，所述亲代鼠1为C57/B6小鼠；

2）亲代鼠2为包含中性粒细胞特异的Cre小鼠，所述的包含中性粒细胞特异的Cre小鼠为LysMcre小鼠；

3）将亲代鼠1和亲代鼠2进行杂交，获得所述杂合的GPX4基因和包含所述Cre基因的小鼠，该小鼠自发出现狼疮表型。

2.如权利要求了1所述的构建方法，其特征在于，还包括将获得的所述杂合的GPX4基因和包含所述Cre基因的小鼠再与亲代鼠2进行回交，筛选获得所述杂合的GPX4基因和包含所述Cre基因的小鼠，该小鼠自发出现狼疮表型。

3.如权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，亲代鼠1具体构建过程为：以sgRNA-Vector为模板PCR扩增出Gpx4-sgRNA的DNA片段，然后胶回收作为sgRNA体外转录的模板，再经过sgRNA体外转录与纯化回收；

根据选定的sgRNA，设计打靶载体，包含同源臂及loxp序列，构建完成后，经酶切、纯化后，与sgRNA、Cas9-mRNA共同显微注射C57小鼠胚胎中，注射后将胚胎移植到代孕受体小鼠的输卵管内。