[发明专利]慢病毒的滴度提高型转移质粒

说明书

本发明提出了一种分离的核酸。该核酸具有X₁X₂TAX₅X₆X₇TX₉所示的核苷酸序列，其中，X₁为A或G；X₂为T或C；X₅为A或G；X₆为C或T；X₇为T或缺失；X₉为T或G；但不具有GTTAACTTT所示的核苷酸序列。根据本发明实施例的分离的核酸位于慢病毒包装转移质粒的cPPT/CTS元件的5’端及5’上游，具有上述分离的核酸的转移质粒进入细胞核效率大幅提高，所包装出的病毒的滴度大幅提高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，本发明涉及分离的核酸、转移质粒、病毒包装试剂盒以及包装病毒的方法。

背景技术

目前，慢病毒作为一种基因递送载体，被广泛的应用于对各种疾病进行基因治疗，如CAR-T制备、造血干细胞基因转导。

慢病毒的生产工艺流程一般包括：①质粒(包括1个转移质粒和辅助质粒)提取和纯化→②质粒共转染293T或293F细胞→③收集病毒上清→④纯化、浓缩、无菌→⑤得到可供基因治疗使用的慢病毒。

现有的技术中，步骤③中得到的慢病毒生产初始滴度低、经步骤⑤得到的可供使用的慢病毒收率也极低(仅20％左右)；而步骤②中是采用瞬时转染的方式，生产成本高，且体系扩大难度极大。这些都导致单批次慢病毒产量十分有限，无法满足高病毒载体用量适应症的治疗需求。

因此，迫切需要开发出新的提高慢病毒产量的技术。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。

为此，在本发明的第一方面，本发明提出了一种分离的核酸。根据本发明的实施例，所述核酸具有X₁X₂TAX₅X₆X₇TX₉所示的核苷酸序列，其中，X₁为A或G；X₂为T或C；X₅为A或G；X₆为C或T；X₇为T或缺失；X₉为T或G；但不具有GTTAACTTT所示的核苷酸序列。根据本发明实施例的分离的核酸位于慢病毒包装转移质粒的cPPT/CTS元件的5’端及5’上游，具有上述分离的核酸的转移质粒进入细胞核效率大幅提高，所包装出的病毒的滴度大幅提高。

根据本发明的实施例，上述核酸还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，具有ACTAGTTG所示的核苷酸序列。具有ACTAGTTG所示的核苷酸序列的核酸的转移质粒所包装出的病毒滴度提高显著。

在本发明的第二方面，本发明提出了一种转移质粒。根据本发明的实施例，所述转移质粒携带前面所述的核酸。根据本发明实施例的转移质粒所包装出的病毒的滴度得到显著提高，相比于现有技术，病毒滴度至少可提高1.3倍。

根据本发明的实施例，上述转移质粒还可以包括如下附加技术特征至少之一：

根据本发明的实施例，位于所述转移质粒中cPPT/CTS元件的5’端及5’端上游。

根据本发明的实施例，所述核酸位于所述转移质粒中cPPT/CTS元件的5’端2～5bp及5’端上游4～8bp范围内，优选地，所述核酸位于所述转移质粒中cPPT/CTS元件的5’端3bp及5’端上游6bp范围内。

根据本发明的实施例，所述转移质粒具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。