[发明专利]包含突变的寨卡病毒全基因组cDNA的DNA分子及其应用有效
| 申请号： | 202010315893.4 | 申请日： | 2020-04-20 |
| 公开（公告）号： | CN113528465B | 公开（公告）日： | 2023-07-11 |
| 发明（设计）人： | 叶青;张蓉蓉;夏青;秦成峰 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/40;C12N15/63;A61K39/12;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京润平知识产权代理有限公司 11283 | 代理人： | 刘依云;乔雪微 |
| 地址： | 100071 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 包含 突变 病毒 基因组 cdna dna 分子 及其 应用 | ||
1.一种包含突变的寨卡病毒全基因组cDNA的DNA分子，其特征在于，所述突变为以下中的任意一种：
(1)寨卡病毒全基因组cDNA的自5’末端起第8403-8405位核苷酸由“GGG”突变为“TAG”；
(2)寨卡病毒全基因组cDNA的自5’末端起第8481-8483位核苷酸由“GCT”突变为“TAG”；
(3)寨卡病毒全基因组CDNA的自5’末端起第9348-9350位核苷酸由“GGG”突变为“TAG”；
所述寨卡病毒全基因组cDNA序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种重组质粒，其特征在于，该重组质粒含有权利要求1所述的DNA分子。
3.根据权利要求2所述的重组质粒，其中，所述重组质粒的5’末端起第1-10808位核苷酸为所述DNA分子，第10809-10875位核苷酸为丁型肝炎病毒核酶序列，第10876-14403位核苷酸为pACYC177载体序列，第14404-14421位核苷酸为启动子。
4.根据权利要求3所述的重组质粒，其中，所述启动子为T7启动子。
5.一株重组寨卡病毒，其特征在于，该重组寨卡病毒的基因组RNA对应的cDNA的核苷酸序列与权利要求1所述的DNA分子的核苷酸序列相同。
6.一种制备重组寨卡病毒的方法，其特征在于，该方法包括将权利要求2-4中任意一项所述的重组质粒进行体外转录，将得到的转录体RNA转染敏感细胞；
其中，所述敏感细胞为能够表达氨酰tRNA合成酶和相应tRNA的细胞。
7.一种构建重组寨卡病毒的方法，其特征在于，该方法包括将寨卡病毒的非结构蛋白NS5自N端起第246、272和561位氨基酸中的任意一个对应的密码子突变为UAG；
所述非结构蛋白NS5的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。
8.权利要求5所述的重组寨卡病毒在制备寨卡病毒疫苗中的应用。
9.权利要求6-7中任意一项所述的方法在制备寨卡病毒疫苗中的应用。
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