[发明专利]腹泻性贝类毒素及其酯化态提取、筛查与质谱确证方法

权利要求书

1.腹泻性贝类毒素及其酯化态提取、筛查与质谱确证方法，其特征在于，包括下列步骤：

（1）毒素提取：

收集平台期藻细胞，加入毒素提取剂，毒素提取剂为甲醇水溶液，涡旋混合，超声提取、离心，移取上清液至离心管中待净化；

（2）毒素净化：

用去离子水将提取液稀释，加载到Strata^TM-X固相萃取柱上，收集洗脱液，氮气吹干，再用甲醇定容，高速离心，吸取洗脱液上清液过0.2 μm滤膜后得样品待测液；

（3）组合型四极杆Orbitrap高分辨液质联用仪测定：

根据不同正负离子扫描模式和碰撞能下各组分的裂解情况确定多级质谱条件参数，将已有标准溶液和待测样品进样依次测定，以标准溶液各组分的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归分析，利用峰面积归一化法测定酯化态毒素的相对近似含量；

（4）定量分析和定性确证：

采用组合型四极杆Orbitrap高分辨质谱的一级母离子全扫描加数据依赖的二级子离子扫描模式（Full MS/dd-MS²），设定涵盖目标化合物的质量数范围600-1500 m/z进行一级全扫描，在扫描过程中，当一级全扫描发现已有标准溶液的母离子时，且信号强度超过预设值后，就会触发数据依赖子离子扫描模式，进而获得对应母离子精确质量数的二级离子全扫描质谱信息；找到碱性水解后消失的毒素组分，然后将毒素组分的二级质谱离子碎片与已有标准溶液的进行对比，若毒素组分中的特征离子碎片和典型脱水峰簇与已有标准溶液的相同，则为酯化态毒素；另外，特征离子碎片和典型脱水峰簇也将作为酯化态毒素的归类依据；综合以上进行酯化态毒素的定量分析和定性确证。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）：甲醇水溶液为体积分数80%的甲醇水溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）：按照毒素提取液中含水比例为60%进行稀释。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）：确定质谱参数为正离子扫描模式和碰撞能为CE10/30eV。