[发明专利]一种基因载体及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 202010317364.8 | 申请日： | 2020-04-21 |
| 公开（公告）号： | CN111658785B | 公开（公告）日： | 2023-05-12 |
| 发明（设计）人： | 吕建平;李镇宇;韩勇;郑俊;赵晶晶;詹夏芽 | 申请（专利权）人： | 威爱医疗科技（中山）有限公司 |
| 主分类号： | A61K48/00 | 分类号： | A61K48/00;A61K38/16;A61K47/34;A61K47/42;A61K49/10;A61K49/12 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 俞梁清 |
| 地址： | 528400 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基因 载体 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种基因治疗药物SPIO-PEI-PEG-VCAM/TFEB，其特征在于，包括基因载体、TFEB和VCAM-1；
所述基因载体由PEG-PEI共聚物和其所包裹的SPIO组成，PEG：PEI：SPIO的质量比为（20-25）：1：3，所述基因载体的粒径为420-450nm；
所述基因治疗药物SPIO-PEI-PEG-VCAM/TFEB的制备方法，包括以下步骤：
（1）称取1g的PEI溶解于50mL的MES缓冲溶液中，配制成浓度为20mg/mL的PEI溶液，备用；分别称取EDC 100mg，DSPE-PEG-COOH 50mg，溶解在5mL的DMSO中，室温下搅拌15-30min；然后按质量比PEI：DSPE-PEG-COOH＝12.5：1，向DMSO溶液中加入PEI溶液，室温下磁力搅拌24小时，然后蒸馏水透析48小时，所述透析的截留分子量为3500Da，-80℃冷冻干燥，即得DSPE-PEG-PEI，置于干燥器存放备用；
（2）称取5mg SPIO溶于2-3mL的四氢呋喃中，然后加入20mg步骤（1）所制得的DSPE-PEG-PEI，并与20mg DSPE-PEG-Mal混合均匀，边超声边滴入40mL的纯水中，超声1h后，产物移入截留分子量为2000Da的透析袋中，透析三天，每天换纯水两次，将透析液冷冻干燥后，得到固体产物，即为基因载体SPIO-PEI-PEG，所述超声的频率为15-25HZ；
（3）称取20mg步骤（2）所制得的基因载体SPIO-PEI-PEG，通过超声分散在PBS缓冲溶液中，然后按质量比SPIO-PEI-PEG:VCAM-1＝10:1，加入VCAM-1，4℃下磁力搅拌24小时，产物移入截留分子量为3500Da的透析袋中，透析三天，每天换纯水两次，将透析液冷冻干燥后，收集固体产物于4℃下保存备用，记作SPIO-PEI-PEG-VCAM；
（4）在无菌的条件下，将10nmol的TFEB用100μL的DEPC水溶解制得浓度为0.1nmol/μL的TFEB，再加入步骤（3）所制得的SPIO-PEI-PEG-VCAM，所述SPIO-PEI-PEG-VCAM与TFEB的质量比为(3-10)：1，然后用Hepes缓冲溶液补足至1mL，混合后置于37℃培养箱静置30min，即得基因治疗药物SPIO-PEI-PEG-VCAM/TFEB。
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