[发明专利]一种GBS DNA核酸检测方法有效
| 申请号： | 202010317546.5 | 申请日： | 2020-04-21 |
| 公开（公告）号： | CN111850143B | 公开（公告）日： | 2023-02-07 |
| 发明（设计）人： | 冯利花;陈建春;周剑峰;李行;贾晓冬;郑宏刚;王超 | 申请（专利权）人： | 天津金域医学检验实验室有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 天津市尚仪知识产权代理事务所(普通合伙) 12217 | 代理人： | 邓琳 |
| 地址： | 300384 天津市滨海新区华*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 gbs dna 核酸 检测 方法 | ||
1.一种非诊断目的的GBS DNA核酸检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
a.在无菌涤纶拭子管中加入生理盐水，混匀制成标本悬浮液；
b.取出全部样品，13000rpm离心10min弃上清；
c.步骤b中获得的沉淀加无水乙醇，混匀，10000-13000rpm离心5-10min弃上清；
d.步骤c中获得的沉淀加无菌生理盐水，混匀，13000rpm离心5-10min弃上清；
e.步骤d中获得的沉淀加入DNA提取液，混匀，加热处理；
f.13000rpm离心10min，吸取上清保存；
g.向PCR反应管中加入步骤f中获得的待测样品后瞬时离心；
h.将PCR反应管置于实时荧光定量PCR仪中，进行扩增反应，根据扩增曲线进行结果判读。
2.根据权利要求1所述的一种非诊断目的的GBS DNA核酸检测方法，其特征在于：步骤c中，离心条件为13000rpm离心5min。
3.根据权利要求1所述的一种非诊断目的的GBS DNA核酸检测方法，其特征在于：步骤e中，加热处理条件为100±5℃加热处理10-12min。
4.根据权利要求1所述的一种非诊断目的的GBS DNA核酸检测方法，其特征在于：步骤g中，将待测样品加入PCR反应管的同时，分别将提取好的GBS阳性对照品和空白对照品也加入PCR反应管。
5.根据权利要求4所述的一种非诊断目的的GBS DNA核酸检测方法，其特征在于：所述GBS阳性对照品的提取方法为：取GBS阳性对照品，13000rpm离心10分钟，弃上清；沉淀加入DNA提取液充分混匀，100℃加热处理10分钟；13000rpm离心10分钟，吸取上清保存；所述空白对照品的提取方法与GBS阳性对照品的提取方法相同。
6.根据权利要求1所述的一种非诊断目的的GBS DNA核酸检测方法，其特征在于：步骤h中，实时荧光定量PCR的反应条件为：a.UNG反应：50℃2min；b.预变形：95℃5min；c.PCR：95℃15s-60℃35s共45个循环；60℃时分别检测FAM和HEX通道的荧光信号，选择反应体系40uL。
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