[发明专利]一种检测多氯联苯的生物传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种检测多氯联苯的生物传感器的制备方法，其特征在于，包括纳米金溶液、发卡探针HAP1和HAP2、Walker、APT、血红素、钾离子、目标物和缓冲液；

HAP1碱基序列如SEQ No.1所示；具体为:5’-AAAAAATTTTTTTTTTTTATTCTCCTTAAACATCCGTCGGAGAATGGGTAGGGCCGACGGATGTTTAAG-3’；

HAP2碱基序列如SEQ No.2所示；具体为:5’-ATCCGTCGGCCCTACCCATTCTCCGACGGATGTTTAAGGAGAATGGGTAGGGCGGGTTGGG-3’；

Walker碱基序列如SEQ No.3所示；具体为:5’-AAAAAATTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCGACGGATGTTTAAGGAGAATGG-3’；

APT碱基序列如SEQ No.4所示；具体为:5’-CACTCGGACCCCATTCTCCTTCCATCCCTCATCCGTCCAC-3’；

所述的目标物为多氯联苯；

所述的生物传感器的制备方法，包括以下步骤：

（1）制备纳米金溶液；

（2）拱形探针的构建；

（3）将拱形探针和发卡探针HAP1修饰到金纳米粒子表面，得到功能化的纳米金溶液；

（4）均相反应：将多氯联苯、发卡探针HAP2、血红素、钾离子和功能化的纳米金溶液加入到均相中，混和均匀后孵育；

（5）荧光仪检测化学发光；

所述的步骤（2）拱形探针的构建步骤如下：

将灭菌水、5×PBS、Walker和APT加入到预先准备好的灭菌的EP管中，震荡30s，在95℃下孵育5min，缓慢冷却至室温杂交为拱形探针，储存于-20 ℃备用。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）中纳米金溶液的浓度为1 nM。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（3）拱形探针和HAP1修饰到金纳米粒子表面的操作步骤如下：

①将拱形探针和HAP1混合，得到混合溶液Q；

②以3 μL/min的速度混合溶液Q加入到纳米金溶液中，搅拌均匀，4 ℃放置；

③以2 μL/min的速度将PB缓冲液加入到纳米金溶液中，搅拌均匀，10分钟后，以2 μL/min的速度将27 μL PBS缓冲液加入到纳米金溶液中，4 ℃放置；

④以2 μL/min的速度将PBS缓冲液加入到纳米金溶液中，搅拌均匀，4 ℃放置；

⑤加入灭菌水洗脱未标记上的DNA链，4 ℃保存备用。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（4）均相反应操作步骤如下：

将发卡探针HAP2、血红素、缓冲液、功能化的纳米金溶液和多氯联苯加入离心管中，震荡30s，于37℃下水浴60 min。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤（5）荧光仪设置激发波长为350 nm，发射波长设置为420 nm，检测范围设置350 nm-550 nm。

6.权利要求1的制备方法制备的生物传感器在检测多氯联苯上的应用。