[发明专利]一种纤维素酶的发酵方法

权利要求书

1.一种纤维素酶的发酵方法，其特征在于，所述方法是以真菌纤维素酶产生菌为菌种，经菌种制备后进行固体或液体发酵生产纤维素酶，在进行固体或液体发酵生产纤维素酶时添加铵盐。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述铵盐为无机铵盐。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述无机铵盐包括硫酸铵、硫酸氢铵、氯化铵、硝酸铵、碳酸铵、碳酸氢铵中的至少一种。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，当进行固体发酵时，铵盐的添加量为固体培养基重量的2.5％-3.5％；当进行液体发酵时，铵盐的添加量为液体培养基重量的1％-3％。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法的具体步骤为：

(1)固体种子制备：将麸皮与水按质量比(50％-55％)：(50％-55％)搅拌均匀，于121-124℃灭菌30-40min，得固体发酵麸皮种子培养基，冷却后在固体发酵麸皮种子培养基接种真菌纤维素酶产生菌的新鲜试管斜面菌种，抖松麸曲，于28-32℃条件下静置培养2-4d，待有白色菌丝长满麸曲表面时，即可作为固体发酵种子；

(2)配制固体发酵培养基：将纤维秸秆、麸皮、水和铵盐按质量比(20％-35％):(10％-25％):(50％-65％):(2.5％-3.5％)配制，于121-124℃灭菌30-40min，备用；

(3)纤维素酶的发酵生产：将固体发酵种子接种至固体发酵培养基，所述按固体发酵种子与固体发酵基本调控培养基的质量比为1:(50-60)，进行开放式发酵，发酵温度为22-32℃，发酵时间3-5d，期间翻曲若干次，待发酵培养基麸曲长出白色菌丝后，麸曲开始转色、并初步形成孢子时，终止发酵，用水浸提、压榨过滤，得到纤维素酶粗酶液，并测定、比较粗酶液的纤维素酶活力；

(4)纤维素酶的纯化、浓缩：将步骤(3)制得的纤维素酶粗酶液经硅藻土预涂，2级板框过滤，再经截留分子量10000Da的超滤膜浓缩，制成内切纤维素酶活力≥1000IU/mL的纤维素酶浓缩液；

(5)纤维素酶的精滤、防腐、包装：将步骤(4)制得的纤维素酶浓缩液经膨润土预涂，添加苯甲酸钠、山梨酸钾、稳定剂，再经2级板框精滤，制成内切纤维素酶活力≥1000IU/mL的工业级纤维素酶，经包装为成品；所述苯甲酸钠与纤维素酶浓缩液的质量百分比为0.25％-0.35％，所述山梨酸钾与纤维素酶浓缩液的质量百分比为0.15％-0.25％，所述稳定剂与纤维素酶浓缩液的质量百分比为0.05％-0.15％。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述纤维秸秆为水稻秸秆、甘蔗渣、玉米秸秆、棉花秸秆中的至少一种粉碎成10-40目。