[发明专利]小分子诱导人脂肪间充质干细胞分化为肝脏样细胞的方法

权利要求书

1.小分子诱导人脂肪间充质干细胞分化为肝脏样细胞的方法，其特征在于按照以下步骤进行：

1)诱导限定性内胚层细胞；

2)从DE细胞诱导获得肝脏祖细胞；

3)诱导获得肝脏成熟细胞。

2.按照权利要求1所述小分子诱导人脂肪间充质干细胞分化为肝脏样细胞的方法，其特征在于：所述诱导限定性内胚层细胞方法如下：

(1)选择第四代hAD-MSCs作为种子细胞，消化待用；

(2)将实验组及对照组细胞接种于孔板中，加入hAD-MSCs培养基培养；

(3)弃去培养基，用PBS洗一遍，加入含有DMSO并含血清F12-DMEM培养基，，诱导；

(4)弃去含有DMSO的诱导培养基，用PBS洗一遍，加入含CHIR99021的含血清F12-DMEM培养基，诱导；

(5)弃去含CHIR99021的含血清F12-DMEM培养基，用PBS洗一遍，加入F12-DMEM培养基，诱导；

(6)收集细胞样品，用多种分子手段检测标志基因Foxa2、Sox17表达情况。

3.按照权利要求1所述小分子诱导人脂肪间充质干细胞分化为肝脏样细胞的方法，其特征在于：所述从DE细胞诱导获得肝脏祖细胞方法如下：

(1)以第四代hAD-MSCs诱导获得的DE细胞作为种子细胞；

(2)弃去F12-DMEM培养基，用PBS洗一遍，加入含有SB431542，sodiumbutyrate和DMSO的无血清F12-DMEM培养基；

(3)每天全量换液一次诱导；

(4)收集细胞样品，用不同方法检测Foxa2、ALB、HNF4α标志基因的表达情况。

4.按照权利要求1所述小分子诱导人脂肪间充质干细胞分化为肝脏样细胞的方法，其特征在于：所述诱导获得肝脏成熟细胞方法如下：

(1)诱导获得肝脏祖细胞后，弃去含有SB431542和sodiumbutyrate的无血清F12-DMEM培养基，用PBS洗一遍，加入含有FH1，FPH1，SB431542，dexamethasone和hydrocortisone的无血清F12-DMEM培养基；

(2)每天全量换液一次，诱导；

(3)收集细胞样品，用不同方法检测AFP、ALB、A1AT标志基因的表达情况。