[发明专利]制备C1,2-位脱氢甾体化合物的方法有效
| 申请号： | 202010323281.X | 申请日： | 2020-04-22 |
| 公开（公告）号： | CN111471736B | 公开（公告）日： | 2022-01-11 |
| 发明（设计）人： | 苏正定;成细瑶;宋士奎;周曦 | 申请（专利权）人： | 武汉艾默佳华生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P33/02 | 分类号： | C12P33/02;C12N9/02 |
| 代理公司： | 北京久维律师事务所 11582 | 代理人： | 杜权 |
| 地址： | 430068 湖北省武*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 制备 c1 脱氢 化合物 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种制备C1,2-位脱氢甾体化合物的方法，包括：
构建表达重组KstD酶的表达载体，其中，所述重组KstD酶的氨基酸序列为SEQ IDNO.3，所述重组KstD酶的N端结合有麦芽糖结合蛋白(MBP)；
利用所述表达载体和细胞培养的方式表达所述重组KstD酶，获得粗酶液；
向所述粗酶液中加入电子受体甲萘醌，所述电子受体甲萘醌在反应液中的质量浓度小于等于1％；
向所述粗酶液中加入底物雄甾-4-烯-3,17-二酮(4-AD)，反应得到C1,2-位脱氢甾体化合物。
2.根据权利要求1所述的方法，还包括：
在反应之前，向所述粗酶液中加入过氧化氢酶，过氧化氢酶在反应液中的浓度小于等于100U/L。
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