[发明专利]一种低温耐硫酸盐的透明质酸裂解酶YNLX-HYL及其应用

说明书

本发明公开了一种低温耐硫酸盐的透明质酸裂解酶YNLX‑HYL及其应用，其氨基酸序列如SEQ NO.1所示。透明质酸裂解酶YNLX‑HYL具有以下性质：最适pH5.5，最适温度35℃，在0℃、10℃和20℃分别具有10％、39％和55％的酶活，在高浓度(NH₄)₂SO₄和Na₂SO₄中具有良好的活性和稳定性，可裂解透明质酸钠制备不饱和的透明质酸寡糖，不饱和的透明质酸寡糖具有良好的抗氧化性，可清除羟自由基、氮自由基、超氧阴离子自由基以及抗2,2'‑联氮双(3‑乙基苯并噻唑啉‑6‑磺酸)二铵盐(ABTS)被氧化的能力。本发明的透明质酸裂解酶可应用于美容、医药、制革等行业。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种低温耐硫酸盐的透明质酸裂解酶YNLX-HYL及其应用。

背景技术

透明质酸又名玻尿酸，是一种天然存在于生物体内的糖胺聚糖。D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-葡萄糖胺以β-1，3糖苷键相连构成二糖单元，该二糖单元再以β-1，4糖苷键连接形成的多糖即为透明质酸。

透明质酸酶能降解透明质酸。第一类透明质酸酶是透明质酸4-糖基水解酶(EC3.2.1.35)，通过水解1，4-糖苷键来降解透明质酸，以四糖分子为主要产物。第二类透明质酸酶是透明质酸3-糖基水解酶(EC 3.2.1.36)，通过水解1，3-糖苷键来降解透明质酸，以四糖和六糖分子为主要产物。第三类透明质酸酶是透明质酸裂解酶(EC 4.2.2.1)，通过β-消除机制降解透明质酸，生成不饱和透明质酸二糖(El-Safory et al.CarbohydratePolymers,2010,81:165–181.)。

透明质酸酶可应用于美容、医药、制革等行业中。例如，透明质酸酶可作为药物注射添加剂以增强机体对药物的吸收效率；在眼科手术中，透明质酸酶作为辅助剂可减少麻药的使用量；透明质酸酶可作为药物用于治疗注射透明质酸的美容术后并发症；透明质酸酶可作为加工皮革的酶，改进制革工艺，降低制革过程对环境的污染。

低温酶可应用于低温环境要求下的生物技术领域，可防止微生物的污染及减少高温下底物降解导致的副产物，低温反应相对高温反应来说能耗更低(Cavicchioli etal.Microbial Biotechnology,2011,4(4):449–460.)。盐对酶的性质能产生巨大的影响。在中性盐中，酶会发生盐析作用，导致大部分的酶在高盐浓度下不具有良好的催化活性。盐广泛存在于在自然界和各种生产实践中，包括污水、洗涤、制革、食品、造纸等，例如，在皮革软化过程中，需要添加硫酸钠。具有耐盐性的酶可更好地应用于高盐环境生物技术领域，在高盐环境下反应还可以防止微生物的污染、节省灭菌等所消耗的能源(Madern etal.Extremophiles,2000,4:91–98)。因此，低温耐硫酸盐的透明质酸裂解酶在制革等行业中具有应用的优势。

发明内容

本发明的目的是提供一种低温耐硫酸盐的透明质酸裂解酶YNLX-HYL及其应用。

本发明技术目的具体通过以下技术方案实现：

一种低温耐硫酸盐的透明质酸裂解酶YNLX-HYL，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明透明质酸裂解酶YNLX-HYL总共含799个氨基酸，理论分子量为88kDa，其中N端20个氨基酸为预测信号肽序列“MKKTNLAFSLLCLSMGSVHA”。与已实验研究过功能的透明质酸裂解酶进行比对，透明质酸裂解酶YNLX-HYL与Streptococcus pneumoniae来源的透明质酸裂解酶(Genbank ID：CTD38391)具有最高的氨基酸序列一致性，仅为30.9％。