[发明专利]编码基因、载体、抗独特型纳米抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明适用于生物技术领域，提供了一种编码基因、载体、抗独特型纳米抗体及其制备方法和应用，该抗独特型纳米抗体的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。该抗独特型纳米抗体是通过噬菌体展示技术成功筛选到所需抗独特型纳米抗体的编码基因，接着，将该编码基因连接到毕赤酵母表达载体中，并电转化至毕赤酵母感受态细胞培养制得的。该抗独特型纳米抗体能够特异性地阻断单抗1E7与PCV2 Cap蛋白的结合，具有模拟PCV2 Cap关键抗原表位的作用，其可用于开发防治PCV2的抗独特性纳米抗体疫苗、诊断试剂及生物试剂等。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种编码基因、载体、抗独特型纳米抗体及其制备方法和应用。

背景技术

猪圆环病毒(Porcine circovirus，PCV)分为非致病性的PCV1(Porcinecircovirus type 1，PCV1)和致病性的PCV2(Porcine circovirus type 2，PCV2)两种类型。PCV2的感染与断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wastingsyndrome，PMWS)的发生密切相关，其ORF2编码病毒的衣壳蛋白(Capsid protein，Cap)是诱导宿主免疫的主要免疫原性蛋白，包含病毒主要的抗原表位。现有技术中，“镜影像”抗独特型抗体(Ab2β)在结构或功能上模拟抗原，可用于制备抗独特型抗体疫苗，识别并鉴定PCV2的细胞受体，用于PCV2诊断方法的建立。

目前，抗独特型抗体的制备方法主要包括多克隆抗体技术、单克隆抗体技术和抗体库技术。多克隆抗体技术制备抗独特型抗体具有批次间抗体质量不均一、纯化工作繁琐等缺点。单克隆抗体技术存在着生产成本高、生产周期长、制备复杂和储存费用高等不足。而抗体库噬菌体展示技术具有简便、快速、经济等特点。

另外，纳米抗体是只由一个重链可变区组成的单域抗体(VHH)，是已知的最小的具有完整抗原结合功能的抗体片段，其相对分子质量仅为抗体的1/10。与普通抗体相比较其特异性更高、亲和力以及结合抗原的能力更强，纳米抗体还具有较强的组织穿透力、高耐热性和高稳定性、高水溶性及易于表达的优点。

因此，目前亟待寻找一种制备模拟PCV2 Cap蛋白关键抗原表位的抗独特型纳米抗体的方法。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供一种抗独特型纳米抗体，旨在解决背景技术中提出的问题。

本发明实施例是这样实现的，一种抗独特型纳米抗体，用于模拟PCV2 Cap蛋白的抗原表位；所述PCV2 Cap蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示；所述抗独特型纳米抗体的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。

本发明实施例的另一目的在于提供一种上述的抗独特型纳米抗体的编码基因，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:3所示。

本发明实施例的另一目的在于提供一种载体，其包含上述的编码基因。

作为本发明实施例的一个优选方案，所述载体是通过将所述编码基因酶切后，再连接到毕赤酵母表达载体中得到的。

作为本发明实施例的另一个优选方案，所述毕赤酵母表达载体为pPICZαA载体。

本发明实施例的另一目的在于提供一种抗独特型纳米抗体的制备方法，其包括以下步骤：

将上述的载体电转化入到酵母感受态细胞中，并经活化后，再涂布于培养基上进行培养，得到单克隆菌落；

挑取所述单克隆菌落，并利用甲醇进行诱导表达，得到所述抗独特型纳米抗体。

作为本发明实施例的另一个优选方案，所述酵母感受态细胞为X-33毕赤酵母感受态细胞。

作为本发明实施例的另一个优选方案，所述培养基为博来霉素抗性的培养基。