[发明专利]一种基于高场核磁共振技术检测多肽药物结构的方法

权利要求书

1.一种基于高场核磁共振技术检测多肽药物结构的方法，其特征在于，包括以下步骤：

采集多肽样品的核磁共振2D ¹H-¹H TOCSY谱、2D ¹H-¹H COSY谱、2D ¹H-¹³C HSQC谱和2D¹H-¹H NOESY谱，通过分析谱图，提取多肽的化学位移归属和空间距离约束，并根据化学位移归属提取二面角约束；化学位移归属时，使用TOCSY、COSY和HSQC对氨基酸残基类型和化学位移进行指认，从NOESY谱图中找到所有氨基酸残基主链氨基H和前后氨基酸α位¹H的NOE信息，结合NOESY实验确定氨基酸残基之间的序列连接信息；

分析NOESY谱图中提取的氢原子之间的距离约束信息，计算得到多肽样品在真空中的初始结构，根据初始结构得到多肽样品在溶剂存在下的空间结构；

根据该空间结构统计距离约束的使用情况，统计结构的角度和距离约束的违约情况，并计算结构的均方根偏差、能量数据和拉氏图数据，得到多肽药物的三维结构。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，使用TALOS软件根据化学位移归属提取二面角约束；使用SANE方法分析NOESY谱图中提取的氢原子之间的距离约束信息；优化CYANA软件和AMBER软件的输入文件格式，使用CYANA软件计算得到多肽样品的在真空中的初始结构，使用AMBER软件对初始结构进行优化，得到多肽样品在溶剂存在下的空间结构。

3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于，将多肽固体粉末溶于不同的缓冲体系，制备不同缓冲体系的多肽样品，完成所有多肽样品的核磁共振1D ¹H谱实验，通过比较不同缓冲体系下1D ¹H谱，选出信号符合要求的样品；缓冲体系的pH为中性或弱酸性，不含有除水分子以外的其它含H原子的分子，该缓冲体系包括水或者PBS缓冲体系。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，提取氢原子之间的距离约束信息时使用所有包含NH和CH的距离信息。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，多肽样品的浓度大于1mM。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，核磁共振周期在700MHz以上。

7.如权利要求3所述的方法，其特征在于，信号符合要求包括：H信号半高宽窄和分散性好，H信号半高宽窄是指其值与多肽分子量匹配，分散性好包括化学位移在6-10ppm的主链氨基¹H的信号个数超过氨基酸个数的80%。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，TOCSY实验的混合时间设置为80ms，NOESY实验的混合时间在200-400ms。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，距离约束的使用情况包括确定的约束的使用数量和模糊计算的距离约束的使用数量，确定的约束的使用数量包括中长程距离约束的使用数量；结构的均方根偏差包括分子中主链原子和重原子的均方根偏差；能量数据包括计算的amber能量、距离约束和角度约束的违约能量。