[发明专利]基于SNE同时实现维D受体多位点准确分型的引物组合物、试剂、检测方法和系统

说明书

本发明提供一种基于SNE同时实现维D受体多位点准确分型的引物组合物、试剂、检测方法和系统。所述基于SNE同时实现维D受体多位点准确分型的引物组合物包括SEQ ID NO：01～SEQ ID NO：12所示的序列。本发明提供的基于SNE同时实现维D受体多位点准确分型的引物组合物具有以下优点：1.相比传统Sanger测序一次只能检测一个位点，本方法的通量是其四倍，效率更高；2.相对QPCR只能区分常见的探针相对应的多态性，本方法不受多态性种类的限制，可以同时检测该位点的所有可能多态性；3.相对QPCR方法，本方法的分型结果直观呈现对应的碱基，准确性高。

技术领域

本发明涉及基因检测领域，具体涉及一种基于SNE同时实现维D受体多位点准确分型的引物组合物、试剂、检测方法和系统。

背景技术

维生素D受体基因(vitamin D(1,25-dihydroxyvitamin D3)receptor,VDR)，定位于12q13.11，全长63.5kb，有11个外显子，mRNA长4775nt，编码428个氨基酸残基组成的维生素D受体(VDR)蛋白，是维生素D3的核激素受体，该蛋白也是胆石酸的第二受体。

VDR属于转录调控因子，为类固醇激素/甲状腺类激素受体超家族的成员，作为配体诱导性复制因子发挥作用。该蛋白对基因表达的调节主要通过一系列代谢反应通路，包括免疫反应通路和肿瘤激活通路。多项国内外研究证实，VDR基因与钙等金属离子在体内的吸收代谢，从而与骨折、骨质疏松、维生素D依赖性II型佝偻病等疾病有显著相关性。

多篇文献报导，VDR基因上存在多个内切酶酶切位点具有种群特异性，BsmI(rs1544410)、Fok1(rs2228570)、TaqI(rs731236)、ApaI(rs7975232)这四个位点被广泛研究，且被证实参与骨代谢，与多种组织细胞的生长分化和免疫调节以及多种疾病相关。

针对4个位点的多态性进行检测，可有效指导相关疾病的诊断和治疗。但目前常用的检测方式大多一次只能检测一个位点，操作较为繁琐；且针对单个位点的常见多态性，容易漏检稀有多态性。

发明内容

为解决现有技术中对BsmI、Fok1、TaqI、ApaI四个位点的多态性检测只能单独进行、容易漏检稀有多态性的问题，本发明提供一种基于SNE同时实现维D受体多位点准确分型的引物组合物。

基于SNE同时实现维D受体多位点准确分型的引物组合物，包括由SEQ ID NO：01～SEQ ID NO：08所示的序列构成的扩增引物，以及由SEQ ID NO：09～SEQ ID NO：12所示的序列构成的延伸引物。

基于SNE同时实现维D受体多位点准确分型的试剂，包括所述基于SNE同时实现维D受体多位点准确分型的引物组合物，以及PCR扩增体系、PCR产物处理体系、SNaPshot反应扩增体系、SNaPshot反应产物处理体系、电泳体系。所述扩增引物中各序列比例为1：1；所述延伸引物中各序列的比例按编号依次为70:10:15:25。

基于SNE同时实现维D受体多位点准确分型的检测方法，包括以下步骤：

步骤一：提取获得待测样本DNA；

步骤二：将所述待测样本DNA、所述基于SNE同时实现维D受体多位点准确分型的试剂，按PCR反应的步骤操作进行反应。

基于SNE同时实现维D受体多位点准确分型的系统，包括：

提取模块，用于提取获得待测样本DNA；

检测模块，将所述待测样本DNA、所述基于SNE同时实现维D受体多位点准确分型的试剂，按所述基于SNE同时实现维D受体多位点准确分型的检测方法的步骤操作进行反应。